碘及TSH对甲状腺乳头状癌细胞miRNA表达的影响

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目的:   碘及血清促甲状腺素(TSH)都与甲状腺癌有着密切的关系,近年来甲状腺癌中相关miRNA的表达变化与其发生发展均有密切联系。但碘及TSH是否会对miRNA的表达产生影响尚未明确。   本文的研究目的是通过体外实验研究人体甲状腺乳头状癌细胞中miRNA在碘、TSH的影响下的表达变化,阐述它们之间的关系,观察影响甲状腺乳头状癌相关miRNA的影响因素,探讨碘及TSH对甲状腺乳头状癌的作用。   方法:   一、细胞培养   人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1,培养基采用RPMI-1640培养液(含10%胎牛血清,青霉素:100U/ml,链霉素:100μg/ml)于5%CO2,95%湿度,37℃孵箱中孵育。细胞呈单层贴壁生长,倍增时间为48小时。   二、实验分组   细胞按以下分组进行实验:添加碘处理因素组设为A组,添加TSH处理因素组为B组。A0及B0组均为对照组,未添加处理因素;A1及B1组均添加生理量碘及TSH; A10及B10组添加10倍处理因素;A100及B100组则为100倍生理量。使培养基中碘的终浓度分别为:102mol/1、10-4mol/1、10-6mol/1,bTSH的终浓度为:0.1mU/L、1.0mU/L、10 mU/L。   三、实验方法   各组加入处理因素后处理24小时后收集细胞。Western Blot法半定量分析 p27kip1、AKT、AP-1的表达,RT-PCR法定量分析miRNA-21、miRNA-221、miRNA-222的表达。各组结果矫正后IDV比值以均数±标准差(x±s)表示,采用统计软件SPSS18.0处理数据,两组均数间的比较用q检验,多组均数间的比较用方差分析。P<0.05差异有显著统计学意义。   结果:   1.碘处理甲状腺乳头状癌细胞TPC-124小时后,在KI的终浓度分别为10-2mol/1、10-4mol/1、10-6mol/1的情况下,miRNA-21、miRNA-221、miRNA-222三种miRNA的表达量较未添加KI的对照组均增加,且增加程度与处理浓度未见明显关联;所对应的蛋白P27kipl表达均减少,下降程度与处理因素浓度亦未见明显关联,蛋白AP-1及AKT表达较对照组均增加,增加程度与处理因素浓度未见明显关联。   2.TSH处理甲状腺乳头状癌细胞TPC-124小时后,在KI的终浓度分别为0.1mU/L、1.0 mU/L、10 mU/L的情况下,miRNA-21、miRNA-221、miRNA-222三种miRNA的表达量较未添加KI的对照组均增加,且增加程度与处理浓度未见明显关联;所对应的蛋白P27kip1表达均减少,下降程度与处理因素浓度亦未见明显关联,蛋白AP-1及AKT表达较对照组均增加,增加程度与处理因素浓度未见明显关联。   结论:   1.甲状腺乳头状癌细胞经碘及TSH处理后,miRNA-21/221/222表达量均上调,p27kip1蛋白表达量下调,AP-1及AKT蛋白表达量上调。碘、TSH对甲状腺乳头状癌细胞中PI3K/AKT信号通路起到上调作用。   2.miRNA-21/221/222表达量均与碘、TSH的浓度相关,蛋白AP-1、AKT的上调以及P27kipl的表达下调也与碘、TSH浓度相关。
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