毛细管电泳技术在中药酚类活性成分中的应用研究

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高效毛细管电泳(high-performance capillary electrophoresis,HPCE)是离子或荷电粒子以电场为驱动力,在毛细管中按其淌度或/和分配系数不同进行高效、快速分离的一种技术。由于其柱效高、低耗、快速、简便及抗污染能力强等优点而倍受青睐,在生命科学、生物技术、临床医学、药物分析和环境科学等领域显示出了极其广阔的应用前景。本论文利用高效毛细管电泳技术对天然药物的有效成分进行了分析,包括两方面的内容:第一部分毛细管电泳法测定菊花和野菊花中的9种黄酮类化合物实验建立了区带毛细管电泳法分离9种生物活性黄酮(蒙花苷、木樨草苷、金合欢素、表儿茶素、儿茶素、香叶木素、木樨草素、芹菜素和山奈酚)的新方法。比较了超声提取和回流提取、不同浓度的甲醇溶液、提取时间对提取效率的影响;研究了紫外检测波长、缓冲液pH、缓冲液浓度、进样时间和分离电压等因素对于分离效果的影响。在优化的条件下,即以20mmol/L硼砂-50mmol/L磷酸二氢钠(pH9.6)缓冲液为电泳介质,进样时间为5秒(进样压力为3.4kPa),紫外检测波长为330nm,分离电压为15kV,9种黄酮类化合物在30min内可实现良好分离。蒙花苷、木樨草苷、金合欢素、表儿茶素、儿茶素、香叶木素、木樨草素、芹菜素和山奈酚的峰面积和浓度分别在5.0~200、5.0~200、2.5~120、2.5~120、2.5~120、1.0~120、2.5~120、2.5~120和2.5~120mg/L范围内呈良好线性,检出限分别为2.5、2.5、1.0、1.0、1.0、0.5、1.0、0.5和0.5mg/L。应用此法测定了3个产地菊花和3个产地野菊花中的9种黄酮类化合物的含量。结果表明菊花中木犀草苷、儿茶素和芹菜素含量较高,野菊花中蒙花苷、木犀草苷、木犀草素、儿茶素含量较高。3种菊花中,杭菊中蒙花苷含量最高(2060.27±37.48μg/g),亳菊中其次(544.85±17.54μg/g),贡菊中未检测到蒙花苷。亳菊中木犀草苷、木犀草素含量分别是贡菊中的2.4倍、8.7倍,杭菊中的4.1倍、3.5倍。亳菊中芹菜素含量高达(2377.40±61.38μg/g),而贡菊、杭菊中芹菜素的含量不能被定量测定。3种产地野菊花中化合物含量具有如下特点,蒙花苷含量最高(1694.26~7266.33μg/g),木犀草苷其次(1131.72~1688.60μg/g),然后是儿茶素(637.63~1279.96μg/g)和木犀草素(524.32~904.34μg/g)。金合欢素、表儿茶素、香叶木素、山奈酚在菊花、野菊花中含量偏少。亳州产菊花和野菊花比较,差异亦很大,蒙花苷含量,野菊花中是菊花中含量的13.5倍,木犀草苷、木犀草素、芹菜素含量菊花中是野菊花中的5.5、3.5、25.5倍。该方法简便、重复性好、准确,是菊花和野菊花中黄酮类化合物定量测定中的一种可靠方法,能够为药材和制剂的质量控制提供依据。第二部分毛细管电泳法比较6种鬼针草提取液中酚类化合物含量的方法研究建立毛细管电泳-DAD法测定鬼针草中10种酚类化合物(木犀草苷、芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮苷、水杨酸、木犀草素、山奈酚、槲皮素、没食子酸和原儿茶酸)含量的新方法,比较不同浓度的乙醇提取溶液对上述化合物提取效率的影响。实验考察了缓冲液pH、浓度、分离电压、毛细管冷却液温度等因素对分离的影响。在214nm检测波长下,60cm长度毛细管中,25mmol/L硼砂(pH9.5),分离电压25kV,毛细管冷却液温度25℃时上述各化合物在16min内能得到完全分离。木犀草苷、芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮苷、水杨酸、木犀草素、山奈酚、槲皮素、没食子酸和原儿茶酸分别在5.0~120、5.0~120、5.0~120、5.0~120、1.0~120、2.5~120、5.0~120、2.5~120、2.5~120和2.5~120mg/L范围内与其峰面积呈线性关系,其检出限分别为2.5、2.5、2.5、2.5、0.5、1.0、2.5、1.0、1.0和1.0mg/L,精密度RSD5.17%(n=6),测定样品的回收率在94.4%到105.8%的范围内。本法选择性好、灵敏度高,重复性好,可用于实际样品的分析。
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