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本次研究的主要目的是建立快速检测甲型肝炎的斑点免疫渗滤试剂盒。反应原理是：以硝酸纤维膜为载体，用抗人μ链包被，通过渗滤作用，与血清中的IgM抗体结合，再加甲肝抗原和金标显色剂，阳性结果有红色斑点出现。本法检测速度快，几分钟即可完成整个试验，无需特殊仪器设备。 胶体金制备方法较多，可以根据不同粒径需要选择适当的方法。本次试验采用柠檬酸三钠还原法制备15nm胶体金。用透射电镜对本次制备的胶体金进行鉴定，结果显示粒径均匀，无多角形等不规则形状出现，粒径为15.5±0.3nm。紫外分光光度计400-700nm扫描结果最大吸收波长为519nm，峰宽较窄。最佳标记pH值实验和蛋白最适保护量实验发现15nm胶体金最佳标记pH值为8.2，蛋白最适保护量为12μg/ml。 在既往工作的基础上，重点在提高检测质量和降低试剂成本等方面进行研究。主要包括以下几个方面：改进反应装置和工艺、优化试剂用量和完善质控措施。 通过缩小孔径和增加深度对既往研究使用的反应装置进行改进。改进后，不仅渗滤均匀，也容易组装。工艺的改进主要是简化反应板组装程序。固相反应板组装程序由原来的打膜、洗涤、包被、标记、封闭、洗膜、装膜，简化为打膜、洗涤、装膜和包被。封闭与样品检测是硝酸纤维膜的活化同时进行。试剂盒的组装周期由24h缩短至30min。既往研究的试剂盒成本在2.10元左右。其中用于包被的抗人μ链的试剂成本在1.10元左右，占试剂总成本的51％；抗原成本为0.7元，占33％。完善工艺和装置后，抗人μ链用量为原来的1/20，成本为0.07元；抗原用量为ELISA的一半，成本为0.35元。金标显色剂对检测有一定影响，用量为“OD≈1，2滴”时，本底低， 第口旱巨大学纱伙铂穴显色清晰，为最佳用量。优化后，本试剂盒成本为0．79元，是既往研究的40％，ELISA成本的66％。检测质量也有明星改善。与国内巳LISA试剂盒相比，灵敏度由完善前的74．07％提高到完善后的93．5％，特异度由61．90％提高到98儿统计学检验有差异。质量控制措施主要包括试剂质量控制和试剂盒质控点的设立。通过ELISA和本研究方法相结合，进行试剂质量控制。结果发现本实验所用抗原较好；直接用抗原包被NCM，加金标探针，有红色斑点出现。说明抗原和探针均有效。在反应孔内设立质控点，使结果判读更容易。 国内报道的斑点免疫渗滤试验多与ELISA试剂盒作对照。本次研究采用ABBOTT试剂盒作标准，对斑点免疫渗滤试验进行了评价。DIGFA灵敏度为93．4S％，特异度为96％，阳性预测值为95．6％，阴性预测值为94．12％，准确度为94．79％。ELISA法灵敏度为95．65％，特异度为94％，阳性预测值为93．62％，阴性预测值为95．92％，准确度为94．79％。两者统计学检测无差异，表明本方法可以作为临床诊断及筛检试剂。类风湿因子试验阴性说明类风湿因子对本实验没有影响。对全血同时进行溶血和血清分离两种处理，两种处理DIGAF检测结果相同，提示本方法可以检测全血。24份血清重复测试3次，结果相同。效期试验证实本是可以稳定保存三个月。