糖尿病是一种以高血糖症状为典型特征的慢性代谢性疾病,随着现在社会经济的高速发展,人民生活方式发生改变,生活水平不断提升,糖尿病的发病率与日俱增,给社会各方面发展带来了繁重的负担。β细胞是人体唯一能够分泌胰岛素调节血糖稳态的细胞,它在应激状态下的凋亡与损伤是引发糖尿病的重要因素。自噬是细胞的一种自我保护机制,可以清除已经被活性氧破坏而无法修复的细胞,调控细胞状态,对于保证β细胞生存和功能是极其重要的。黄芩是传统用于治疗糖尿病的天然药物,在各方面都有着西药无法比拟的特殊优势,但其具体的作用机理并不明确。本研究首先分析了黄芩水提物中主要黄酮类物质成分并测定了其具体含量,再从β细胞胰岛素释放功能、自噬与凋亡等三个方面系统探究了黄芩水提物治疗糖尿病的机理,并探讨自噬与凋亡及β细胞功能三者之间的联系,为黄芩后续药理作用研究提供基础,为自噬在糖尿病治疗方面提供一定的理论依据。本研究主要从以下几个方面进行,结果如下:1、通过高效液相色谱初步分析黄芩水提物中黄酮类活性成分,并对黄芩水提物中主要化学成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素进行含量测定。研究使用黄芩水提物及其主要化学成分物质处理MIN-6细胞,并检测其培养上清液中胰岛素水平和相关自噬现象。结果表明黄芩水提物和黄芩素都能够提高不同浓度葡萄糖刺激下胰岛β细胞胰岛素的分泌,且是通过自噬途径发挥作用。2、利用细胞免疫荧光技术通过单因素试验发现当黄芩水提物稀释1000倍,处理24h时,可显著升高MIN-6细胞中的自噬水平。进一步使用western-blot手段检测了自噬相关蛋白,发现自噬标志性蛋白LC3的转化量增加,自噬底物蛋白P62的表达量减少,AMPK磷酸化水平升高,MTOR总蛋白表达无明显变化,说明黄芩水提物通过激活AMPK途径诱导β细胞自噬流的产生且其最佳处理为稀释1000倍,处理24h。3、用黄芩水提物干预高糖压力下的MIN-6细胞,使用流式细胞仪检测其凋亡率,发现黄芩水提物+高糖组的凋亡率明显低于高糖组,说明黄芩水提物能够保护高糖压力下的MIN-6细胞。同时细胞免疫荧光检测发现高糖组自噬强度与对照组无显著性差异而黄芩水提物+高糖组的自噬效果明显。进一步实验探究发现黄芩水提物在高糖压力下的保护作用能够被自噬抑制剂3MA所抑制。说明黄芩水提物通过自噬途径保护高糖下β细胞的凋亡。结论:黄芩水提物能够通过AMPK途径激活β细胞自噬保护高糖压力下β细胞的凋亡并促进β细胞胰岛素的分泌,且黄芩素除调控K+通道还可部分通过自噬途径促进胰岛素分泌。