论文部分内容阅读
目的:观察不同浓度胰岛素对小胶质细胞功能的影响及PI3K/AKt在其中的作用。方法:分别以BV2、PC12细胞株代表小胶质细胞和神经元。以BV2细胞为研究对象,根据是否应用PI3K/AKt信号阻断剂(LY294002)分为阻断剂组与对照组。用含有不同浓度胰岛素(0 ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,150ng/ml,200 ng/ml)的无血清培养基培养BV2细胞20h,取各组上清液培养PC12细胞1h后加入H2O2损伤,常规培养20h后应用MTT法检测各组PC12细胞存活率以反映胰岛素影响下小胶质细胞功能状态变化及PI3K/AKt在其中的作用。采用ELISA法检测两组BV2细胞在不同功能状态下分泌IL-1β、NGF的情况。结果:1、当胰岛素浓度为0 ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,150ng/ml,200 ng/ml时,对照组PC12细胞存活率分别为47.58±0.58%、58.23±1.07%、73.67±0.58%、71.87±1.34%、44.56±1.31%,单因素方差分析差异有统计学意义,组内两两比较,除胰岛素浓度为100ng/ml与150ng/ml之间比较无统计学意义外,其余各两组间比较均存在显著性差异(P<0.05);加入阻断剂LY294002预处理后,与同等胰岛素浓度下的对照组相比,阻断剂组PC12细胞存活率(除胰岛素浓度为0ng/ml)显著降低(P<0.05),其存活率分别为48.91±1.21%、55.31±2.34%、70.87±1.03%、51.64±1.43%、39.01±3.20%。2、当胰岛素浓度为0 ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,150ng/ml,200 ng/ml时,对照组NGF的水平分别为537.01±5.91 ng/L、564.49±10.18 ng/L、588.23±6.52 ng/L、586.07±15.16 ng/L、517.25±4.33 ng/L,单因素方差分析差异有统计学意义,组内两两比较,除胰岛素浓度为100ng/ml与150ng/ml之间比较无统计学意义外,其余各两组间比较均存在显著性差异(P<0.05);加入阻断剂LY294002后,与同等胰岛素浓度下的对照组相比,阻断剂组NGF分泌量(除胰岛素浓度为0 ng/ml外)均显著降低(P<0.05),分别为522.19±10.13 ng/L,541.39±5.87 ng/L,568.49±3.52 ng/L,528.17±1.43 ng/L,492.73±10.27 ng/L。3、当胰岛素浓度为0 ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,150ng/ml,200 ng/ml时,对照组IL-1β水平为16.14±0.15 ng/L、15.24±0.52 ng/L、11.73±0.40 ng/L、13.67±0.56ng/L、19.30±0.52 ng/L,单因素方差分析差异有统计学意义,组内两两比较差异有显著性(P<0.05);加入阻断剂LY294002后,在同等条件下,阻断剂组IL-1β分泌量与对照组比较无统计学意义(P>0.05),分别为16.38±0.11ng/L、15.03±0.56 ng/L、11.67±0.50 ng/L、13.58±0.57 ng/L、19.38±1.46 ng/L。结论:1、不同浓度胰岛素作用下小胶质细胞功能不同,胰岛素浓度为50ng/ml~150ng/ml时,小胶质细胞呈现细胞保护作用,当胰岛素浓度增大至200 ng/ml时,小胶质细胞表现出细胞损伤作用。小胶质细胞的这种功能变化与其分泌的NGF、IL-1β有关。2、在胰岛素影响下,PI3K/Akt在小胶质细胞保护功能中发挥重要作用,且这一过程是通过调节NGF的分泌量来实现的。