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发作性睡病(Narcolepsy)是以发作性嗜睡、猝倒、睡瘫与入睡性幻觉为主要临床特点的一种疑难病,近几年呈上升趋势,严重影响人类生活质量。研究表明,下丘脑分泌素(Hypocretin,HCRT)相关分子通路异常是发作性睡病发生的重要原因之一,是未来药物治疗的重要靶点,目前已有一些文献报道,中药处理可以影响HCRT相关分子通路。中药醒神通窍汤是承传名老中医临床经验、基于发作性睡病阴阳失衡、神蒙窍闭的病机而制定的方剂,对于发作性睡病有较好的临床疗效,其中部分单味药已证明具有影响HCRT相关分子通路的作用。本研究拟从分子、细胞水平系统分析中药醒神通窍汤影响HCRT相关分子通路的分子机制及治疗发作性睡病的一些可能作用机制,为研究中医药治疗该病的作用机制提供新思路,并为指导临床用药提供依据。目的:1)探讨中药醒神通窍汤影响HCRT相关分子通路的分子机制。2)研究中药醒神通窍汤治疗发作性睡病的分子机制。方法:1)制备中药醒神通窍汤水煎剂,通过CCK-8法观察醒神通窍汤不同剂量对SH-SY5Y细胞增殖的影响;2)通过Transwell实验观察醒神通窍汤不同剂量对SH-SY5Y细胞迁移能力的影响;3)通过Annexin V-FITC实验观察醒神通窍汤不同剂量对SH-SY5Y细胞凋亡的影响;4)通过实时荧光定量PCR方法观察醒神通窍汤对SH-SY5Y细胞0X1R、0X2R mRNA表达量的影响;5)通过Western Blot方法观察醒神通窍汤SH-SY5Y细胞HCRT分子通路相关蛋白表达量的影响;6)建立SH-SY5Y细胞0X1R过表达细胞模型,观察0X1R过表达对SH-SY5Y细胞增殖、迁移、凋亡及HCRT分子通路相关蛋白表达量的影响;7)观察醒神通窍汤对0X1R过表达细胞模型的细胞增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。结果:1)醒神通窍汤1mg/ml组、800ug/ml组、600ug/ml组、400ug/ml组均在药物干预72h后对SH-SY5Y细胞增殖出现抑制作用,96h抑制率上升。醒神通窍汤不同浓度中,以醒神通窍汤1mg/ml组干预96h后抑制细胞增殖作用最强。2)Transwell迁移实验结果表明,与空白组相比较,醒神通窍汤1mg/ml组能增加SH-SY5Y细胞迁移细胞数,有显著性差异(P<0.01)。3)Annexin V-FITC实验结果表明,与空白组相比较,醒神通窍汤1mg/ml组可促进SH-SY5Y细胞的凋亡率,有显著性差异(P<0.01)。4)实时荧光定量PCR实验结果表明,与空白组相比较,醒神通窍汤1mg/ml组能增加SH-SY5Y细胞的OX1R、0X2R mRNA表达量,有显著性差异(P<0.01,P<0.05);其中,以醒神通窍汤1mg/ml组干预48h后0X1R表达量增高最明显,醒神通窍汤1mg/ml组干预24h后0X2R表达量增高最明显(P<0.01)。5)醒神通窍汤1mg/ml不同时间干预后,SH-SY5Y细胞总蛋白中ERK1/2、p38 MAPK、JNK磷酸化水平可一定程度上降低(P<0.01)。6)与SH-SY5Y细胞相比,SH-SY5Y细胞的OX1R基因过表达模型细胞增殖和迁移能力下降;细胞凋亡率增加;细胞总蛋白中ERK1/2磷酸化水平升高、p38 MAPK、JNK磷酸化水平均降低(P<0.01)。7)醒神通窍汤不同浓度在干预48h、72h、96h均对OX1R过表达模型细胞SY5Y-OX1R的细胞增殖出现抑制作用,600ug/ml组可增强该模型细胞迁移能力,1mg/ml组可促进该模型细胞凋亡,有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。结论:1)醒神通窍汤可能通过抑制SH-SY5Y细胞的增殖、促进SH-SY5Y细胞的迁移能力和凋亡、增加OX1R、OX2R表达量,降低ERK1/2、p38 MAPK、JNK磷酸化水平影响HCRT相关分子通路。2)OX1R基因过表达可以一定程度上抑制SH-SY5Y细胞增殖和迁移,促进SH-SY5Y细胞凋亡,并提高ERK1/2磷酸化水平,降低p38 MAPK、JNK磷酸化水平。3)醒神通窍汤可以一定程度上抑制SH-SY5Y OX1R过表达细胞模型的细胞增殖,促进该模型细胞的细胞迁移和凋亡。4)醒神通窍汤可能通过抑制细胞增殖、促进细胞迁移和凋亡,增加OX1R、OX2R表达量,并通过影响ERK1/2 MAPK通路相关分子蛋白表达发挥对发作性睡病的治疗作用。