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为探讨玻璃化冷冻保存对卵母细胞DNA甲基化的影响,本实验首先研究了小鼠M Ⅱ期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后印记基因H19,Peg3和Snrpn差异甲基化区域DNA甲基化状态,同时研究了卵母细胞解冻后与DNA甲基化相关酶的相对表达量。结果表明,和新鲜卵细胞相比,小鼠成熟的卵母细胞玻璃化冷冻解冻后其基因组印记基因H19,Peg3和Snrpn差异甲基化区域DNA甲基化模式并没有发生改变,与DNA甲基化相关的酶Dnmtl,Dnmt3a,Dnmt3b和Dnmt3l相对表达量均显著下降(P<0.05),与DNA去甲基化相关的酶Tet3相对表达量显著下降(P<0.05)。其次,检测了冷冻卵母细胞经体外受精获得的囊胚基因组中印记基因H19,Peg3和Snrpn差异甲基化区域的DNA甲基化模式,以及DNA甲基化转移酶和二种与DNA去甲基化相关的酶(Tetl,Tet2和Tet3)的相对表达量。结果显示,H19DMR整体甲基化水平在冷冻组(30.95%)和新鲜组(32.15%)之间差异不显著(P>0.05),冷冻组Peg3DMR平均甲基化水平为30.19%显著低于新鲜组(35.38%)(P<0.05),冷冻组Snrpn DMR平均甲基化水平为]8.13%显著低于新鲜组(35.48%)(P<0.05)。两组间Dnmtl,Dnmt3a,和IDnmt3l相对表达量差异不显著(P>0.05),冷冻组Dnmt3b相对表达量显著低于新鲜组(P<0.05)。冷冻组Tetl,Tet2和Tet3的相对表达量和新鲜组相比差异不显著(P>0,05)。继而探讨了玻璃化冷冻卵母细胞产生的DNA甲基化模式的改变能否影响到后续植入胚胎原始生殖细胞中的DNA甲基化重编程,由冷冻卵母细胞经体外受精得到的2-cell胚胎移植到受体鼠内,检测了E13.5胚胎中原始生殖细胞基因组中印记基因H19,Peg3和Snrpn的差异甲基化区域的DNA甲基化模式,以及反转座子的重复序列Linel-5’和IAP-LTR的DNA甲基化状态。结果显示,(])E13.5雌性胚胎原始生殖细胞中H19差异甲基化区域的DNA甲基化平均水平其冷冻组(3.34%)显著低于新鲜组(16.44%)(P<0.05),而在雄性胚胎原始生殖细胞中两者无显著性差异,均处于完全的未甲基化状态；(2)在冷冻组中,雌性胚胎原始生殖细胞Peg3DMR仍有5.88%的DNA甲基化,和新鲜组(0%)相比差异显著(P<0.05),而冷冻组雄性胚胎原始生殖细胞Peg3DMR DNA甲基化水平为41.97%显著高于新鲜组(0%)(P<0.05)；(3)Snrpn差异甲基化区域的DNA甲基化状态在E13.5时,雌性和雄性胚胎原始生殖细胞中均处于未甲基化状态；(4)冷冻组E13.5雌性胚胎原始生殖细胞中Linel-5’位点的DNA甲基化平均值为38.02%,和新鲜组(36.51%)之间无显著性著异。而雄性胚胎原始生殖细胞中,其冷冻组的DNA甲基化水平(14.03%)显并高于新鲜组(6.25%)(P<0.05)；(5)冷冻组雌性胚胎原始生殖细胞IAP-LTR位点的DNA甲基化水平(36.37%)显著低于新鲜组雌性(48.18%),而在冷冻组雄性胚胎原始生殖细胞中,此位点的DNA甲基化水平(93.93%)显著高于新鲜组(57.14%)(P<0.05)。综上所述,小鼠MⅡ期卵母细胞经玻璃化冷冻后不会影响其印记基因差异甲基化区域DNA甲基化,但冷冻后卵母细胞会导致DNMTs和TETs mRNA相对含量下降；由冷冻卵母细胞得到的囊胚其印记基因DNA甲基化水平显著降低,且影响Dnmt3b的表达量。由冷冻卵母细胞得到的胚胎原始生殖细胞Peg3DMR甲基化模式异常,并导致反转座子的重复序列DNA模式异常。