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目的:肺纤维化是一种严重威胁人类健康的慢性疾病,全球发病率逐年上升。传统西药治疗方式采用激素和免疫抑制剂治疗,不仅副作用大且治疗效果不佳。近年来中药在肺纤维化治疗方面显示良好前景。本课题组在古方基础上进行优化获得甘参复方,前期实验显示其具有良好的抗肺纤维化作用。本研究将对甘参复方治疗肺纤维化的作用进行评价,并对其作用机制进行初步研究。方法:1小鼠肺纤维化模型建立及动物分组:取70只SPF级健康BALB/c小鼠,雄性,随机分为7组,每组10只。分别为正常对照组(NS)、博莱霉素模型组(BLM)、地塞米松组(DEX)、吡非尼酮组(Pirfenidone)、甘参复方高剂量组(mKG-H)、复方中剂量组(mKG-M)、复方低剂量组(mKG-L)。除NS组外,其余各组小鼠采用一次性气管滴注BLM溶液(2mg/kg)制作小鼠肺纤维化模型。药物治疗各组于造模后第1天给予相应的药物进行治疗,NS组和BLM组给予0.9%生理盐水灌胃,在第21天进行取材。2通过观察小鼠体重、肺系数、制作小鼠肺组织HE染色切片、Masson染色切片,并对切片进行炎症评分、纤维化评分,从而对肺纤维化模型的建立和mKG对肺纤维化小鼠的肺组织病理变化的影响进行评价。3采用RT-PCR法检测小鼠肺组织中IL-6、IL-17 mRNA水平表达量,评价mKG对肺纤维化小鼠炎症反应的影响。4采用ELISA法检测小鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量,通过免疫组化分析小鼠肺组织Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原,评价mKG对肺纤维化小鼠胶原含量和胶原表达的影响。5采用ELISA、RT-PCR和Western blot法检测小鼠肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA mRNA水平及蛋白水平表达量,评价mKG对肺纤维化小鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响。结果:1与NS组相比,BLM组的小鼠平均体重有显著降低。BLM组的小鼠的肺系数显著高于NS组(P<0.01)。肺组织HE染色和Masson染色结果显示,BLM组小鼠肺组织炎症浸润情况和肺泡间质胶原沉积情况与NS组相比显著加重,BLM组小鼠肺组织炎症评分和纤维化评分显著高于NS组(P<0.01),表明BLM成功诱导小鼠肺纤维化。2给药组中Pirfenidone组和mKG-H组、mKG-M组小鼠的平均体重均显著高于BLM组小鼠的平均体重(P<0.01)。Pirfenidone组和mKG-H组小鼠的肺系数均显著低于BLM组小鼠肺系数(P<0.01)。3小鼠肺组织病理切片HE染色和Masson染色结果显示,与BLM组相比,mKG-H、mKG-M、Pirfenidone组可显著抑制肺纤维化小鼠肺组织中炎症及纤维化程度(P<0.01);DEX组与BLM组相比,纤维化程度有显著减轻(P<0.05),mKG-L组炎症浸润情况和纤维化情况与BLM组相比无统计学差异。4 RT-PCR法测定小鼠肺组织中IL-6、IL-17 mRNA的表达水平,结果显示,与BLM组相比,各给药组中mKG-H组、mKG-M组、Pirfenidone组可极显著降低小鼠肺组织中IL-6、IL-17 mRNA的表达(P<0.01);mKG-L组和DEX组IL-6、IL-17mRNA的表达有显著降低(P<0.05)。5 ELISA法测定小鼠肺组织中HYP含量,结果显示BLM组小鼠肺组织的HYP含量与NS组相比有极显著增高(P<0.01)。Pirfenidone组和mKG-H组可降低肺纤维化小鼠HYP含量,具有极显著性(P<0.01);mKG-M组和DEX组HYP的表达有显著降低(P<0.05)。同样,小鼠肺组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化检测结果显示,与BLM组比较,Pirfenidone组和mKG-H组可降低col-Ⅰ、col-Ⅲ的表达,具有极显著性(P<0.01);mKG-M组和DEX组col-Ⅰ、col-Ⅲ的表达有显著下降(P<0.05);mKG-L组col-Ⅰ、col-Ⅲ的表达与BLM组相比无统计学差异。6 RT-PCR法测定小鼠肺组织中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的表达水平,结果显示,与BLM组相比,mKG-H组、Pirfenidone组的Smad2、Smad3 mRNA的表达量均有降低,具有极显著性(P<0.01);mKG-M组Smad3 mRNA的表达量有显著降低(P<0.01)。各给药组的Smad7 mRNA的表达量相比较于BLM组均无差异。7 Western blot法测定小鼠肺组织中TGF-β1、α-SMA、磷酸化Smad3(P-Smad3)、Smad3蛋白表达量,结果显示,各组间Smad3蛋白表达量无统计学差异。与BLM组相比,各给药治疗组小鼠肺组织中的TGF-β1、α-SMA、P-Smad3蛋白表达量均有降低,具有极显著性(P<0.01)。ELISA法测定小鼠肺组织中TGF-β1表达量,结果显示BLM组小鼠肺组织的TGF-β1含量与NS组比较有极显著性增高(P<0.01)。与BLM组比较,Pirfenidone组和mKG-H组TGF-β1的表达量出现极显著性下降(P<0.01);mKG-M组、mKG-L组和DEX组TGF-β1的表达量有显著降低(P<0.05)。结论:1甘参复方可以有效减轻制肺纤维化小鼠肺部炎症。2甘参复方能够有效抑制小鼠肺组织纤维化。3甘参复方可能通过TGF-β1/Smad3通路来抑制肺纤维化进程,但是没有激活通路中Smad7的负反馈调节。