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实验目的:通过建立单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral obst ruction,UUO)诱导的大鼠肾纤维化动物模型,观察六味地黄丸对大鼠肾脏自噬水平的影响,探讨六味地黄丸治疗肾纤维化的作用机制是否与调节肾脏自噬水平有关。实验方法:将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、UUO模型+六味地黄丸组(3g/kg.d)、UUO模型+缬沙坦阳性对照组(30mg/kg.d),每组10只。通过游离并结扎离断左侧输尿管建立UUO模型,假手术组只游离不结扎离断左侧输尿管,于术后第二天开始给药,分别给药6周,假手术组和模型组每只每天给2ml生理盐水。6周后处死大鼠,处死前一天收集24h尿液测24h尿蛋白定量。测量体重,用10%水合氯醛以0.35ml/100g的剂量腹腔麻醉成功后解剖大鼠胸腹部立即采集心脏动脉血和肾脏组织学标本,用全自动生化分析仪检测各组大鼠的肝功能、肾功能电解质、24h尿蛋白定量等指标,通过HE染色和Masson染色观察肾脏组织病理学变化,并进行半定量评估肾间质纤维化相对面积百分比;用Western blot蛋白质印迹法检测肾脏自噬标志蛋白LC3和Beclin1水平。实验结果:1.模型建立成功:梗阻侧肾脏术后一周,可见肾脏体积增大,皮质变薄,通过HE染色观察到肾间隙增大,肾间质出现局灶性淋巴细胞和单核细胞浸润,肾间质纤维化。术后两周,肾脏体积进一步增大,皮质进一步变薄,表皮不光整,颜色变白,肾间质纤维化明显,术后三周,肾脏体积明显增大,呈透明囊状,肾内有大量淡黄色液体,呈弥漫性肾纤维化,表明梗阻性肾纤维化造模成功。2.体重变化:随着饲养时间的延长,各组大鼠体重都有不同程度地增长,在造模前至给药第2周,各组大鼠体重增长差异无统计学意义(P>0.05),给药三周后,与假手术组相比,其余各组大鼠体重增长速度都相对降低,且组间差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,六味地黄丸组和缬沙坦组大鼠体重增长速度较快,且组间差异具有统计学意义(P<0.05);六味地黄丸组和缬沙坦组相比,体重变化差异无统计学意义(P>0.05)。3.生化指标检测结果:各组大鼠的肝功能检测结果发现,组间差异不显著(P>0.05)。与假手术组相比,模型组、六味地黄丸组和缬沙坦组的血清肌酐及尿素组间差异都有统计学意义(P<0.05),六味地黄丸组尿酸与其差异不显著(P>0.05);与模型组相比,六味地黄丸组和缬沙坦组的血清肌酐、尿素、尿酸水平组间差异有统计学意义(P<0.05),六味地黄丸组与缬沙坦组两者差异没有统计学意义(P>0.05)。与假手术组相比,各组大鼠的24h尿蛋白定量值均有不同程度的升高,且组间差异具有统计学意义(P<0.05),与模型组相比,六味地黄丸组和缬沙坦组都有所降低,差异有统计学意义(P<0.05),且六味地黄丸组低于缬沙坦组,两组差异不明显(P>0.05)。与假手术相比,各组大鼠的钾均有不同程度的升高,六味地黄丸组与假手术组差异不显著(P>0.05),模型组和缬沙坦组与其差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,各组大鼠的钾均有不同程度地降低,各组间差异均有统计学意义(P>0.05)。各组大鼠的钠、氯、钙及二氧化碳结合力的组间差异均无统计学意义。4.组织病理学改变:HE和MASSON染色可见:假手术组大鼠肾小球、肾小管及肾间质未见明显病理改变;与假手术组相比,其余各组大鼠可见肾皮质和实质变薄,肾间质肿胀,空泡变性,肾小管上皮细胞萎缩,肾间质纤维组织增生,胶原纤维增多,结构排列不规则,肾间质纤维化半定量评估较假手术组有不同程度地加重(P<0.05);与模型组比较,缬沙坦组和六味地黄丸组纤维化程度都有所改善,六味地黄丸组较缬沙坦组改善更为显著,肾间质纤维化半定量评估明显降低(P<0.05),六味地黄丸组与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P>0.05)。5.Western blot蛋白检测结果:与假手术组相比,模型组、六味地黄丸组和缬沙坦组的LC3、Beclin1水平都升高,除六味地黄丸组与假手术组的Beclin1水平差异无统计学意义(P>0.05)外,其他各组间差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,六味地黄丸组和缬沙坦组的LC3、Beclin1水平都降低,六味地黄丸组较缬沙坦组降低更为显著。实验结论:(1)六味地黄丸可以改善大鼠肾功能,延缓单侧输尿管梗阻引起的肾纤维化进展。(2)自噬参与了肾纤维化的发生发展,过度自噬可能加快肾纤维化进展。(3)六味地黄丸可能通过抑制肾脏自噬水平从而改善肾纤维化。