利用双向电泳和质谱技术筛选矽肺血清差异蛋白

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矽肺是由于长期吸入游离二氧化硅(SiO2)粉尘所引起的以肺间质纤维化为主的全身性疾病,是常见的、危害最严重的职业病之一,病情严重、死亡率高。停止粉尘暴露,病程依然进展。2005年全国各类职业病报告12 212例,其中尘肺病病例报告9 173例,而矽肺病例占尘肺总病例约50%。矽肺所造成的经济损失十分巨大,据专家估算,年直接经济损失约90亿元人民币,间接损失更大。由于矽肺发病迅速,早期诊断和干预尤显重要。直至现在,矽肺的发病机理仍然不完全清楚,无早期诊断的特异性标志物,也无特异性的治疗药物和方法。近年来蛋白质组学技术的飞速发展,为研究疾病发病机制和探索早期诊断(筛检)的生物标记物,提供了新的思路和技术平台。由于矽肺纤维化过程中有许多反应氧物质(reactive oxygen species, ROS)和反应氮物质(reactive nitrogen species, RNS)等氧化剂、炎症细胞因子、生长因子、凋亡及抗凋亡因子以及有关信号通路的小分子物质参与,这些蛋白质或小分子物质在肺组织中的变化必然会通过相应的途径释放至血清,引起其在血清中的浓度变化,同时也会级联其它一些相关蛋白质发生相应变化,从理论上为矽肺的血清差异蛋白质组学研究提供了依据。本研究采用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)对矽尘暴露人群和对照组人群血清进行比较蛋白质组学研究,寻找矽肺血清差异蛋白,探索早期诊断(筛检)的生物标记物,以期为预防和早期治疗矽肺提供帮助。目的建立正常人和矽肺人群血清双向电泳图谱,寻找矽肺血清差异蛋白,进一步探索其发病机制及潜在生物标记物。方法按照国家尘肺病诊断标准(GBZ70-2002),选择山西省阳泉市某硫铁矿诊断为矽尘暴露(0)、可疑矽肺(0~+ )、一期矽肺(I)的工人为研究对象。并选择当地同年龄组的健康人群作为对照。各组均选取30例研究对象,采用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)技术,对矽尘暴露(0)、可疑矽肺(0+ )、一期矽肺(I)和对照组人群混和血清进行比较蛋白质组学研究,寻找矽肺发病过程中血清差异表达蛋白。结果初步发现了补体C4、富亮氨酸α-2糖蛋白、α-1抗胰蛋白酶在0~+组血清中表达显著升高(P <0.01),在对照组、0组、I组中表达均较低;转铁蛋白则在0+组血清中表达显著下调(P <0.01)。血浆谷胱甘肽过氧化物酶、四连接素、载脂蛋白A-I,甲状腺素运载蛋白在对照组和0组血清中表达相当,随着肺纤维化的进展,在0~+和I组中逐渐下降。结论1.补体C4、富亮氨酸α-2糖蛋白、α-1抗胰蛋白酶、转铁蛋白在可疑矽肺(0~+ )组血清中表达发生显著变化,提示其与矽肺发病过程中早期的溶细胞及炎症反应可能存在某种关联,并可能具有反映矽肺早期病变的潜在参考价值。2.血浆谷胱甘肽过氧化物酶、四连接素、载脂蛋白A-I和甲状腺素运载蛋白随肺纤维化的进展发生了差异表达,可能与矽肺后期纤维化的形成有一定潜在的关联,并可能有预示矽肺病情发展的潜在价值。以上结果还需利用其它生物学的方法如Western-blot或ELISA进行个体验证,并进一步探索其与矽肺发病机制的关系,以期能为预防和早期治疗矽肺提供参考。
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