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目的Kinesin-12(Kif15)是一种微管依赖的马达蛋白,已知它在促进有丝分裂纺锤体的组装、染色体的分离及胞质分裂等方面发挥着重要作用。我们之前的研究发现,这些有丝分裂的马达蛋白也会在终末分化的神经元中表达,参与促进新生神经元在脑部迁移以及建立树突和轴突间的联系等重要事件。Kinesin-12是一种有丝分裂的马达蛋白,可能是通过调控微管的运动和组装,参与神经元发育的各种事件。关于Kinesin-12发挥功能的分子机制以及这种功能是否在神经系统的其它细胞类型中有所体现目前还不得而知。本研究中,我们采用体外培养大鼠脊髓星形胶质细胞,观察干扰Kinesin-12对细胞增殖和迁移的影响及对分子机制的探究。方法在体外培养的星形胶质细胞中采用si RNA干扰Kinesin-12表达,利用Ed U、Transwell实验观察对细胞增殖、迁移的影响。采用CO-IP、GST-pulldown和si RNA/CO-IP实验证明Kinesin-12与Myosin ⅡB(一种非肌型Myosin-II重链)在Myosin-tail区是否存在相互作用。通过细胞免疫荧光、荧光共振能量转移(FRET)检测二者在细胞中的共定位情况。结果1.在体外培养的星形胶质细胞分别用Kinesin-12,Kinesin-5及Kinesin-12/Kinesin-5 si RNA处理3d后,采用Ed U实验检测对细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测对细胞周期的影响。与对照组相比,干扰Kinesin-12,Kinesin-5及双干扰后,星形胶质细胞的增殖能力分别下降了24.7%、32.9%及46.9%。流式细胞术检测发现Kinesin-12和Kinesin-5可能存在不同的作用机制。2.分别用Kinesin-12,Kinesin-5及Kinesin-12/Kinesin-5 si RNA处理3 d后,采用Transwell实验检测对细胞迁移的影响。结果显示,干扰Kinesin-12能显著促进细胞迁移。3.CO-IP、GST-pulldown、si RNA/CO-IP实验分析表明Kinesin-12(743-1333 aa)与Myosin ⅡB(1345-1648 aa)直接相互作用。4.细胞免疫荧光、FRET实验显示Kinesin-12与Myosin ⅡB在星形胶质细胞的lamellar区存在共定位。结论体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞中干扰Kinesin-12基因表达,能够显著抑制细胞增殖促进细胞迁移。Kinesin-12(743-1333 aa)与Myosin ⅡB(1345-1648aa)存在相互作用并在细胞的片状伪足区域存在共定位。推测两者可能以异源聚合体形式联系微管微丝从而调整细胞骨架重构。