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目的:探讨雄激素阻断对膀胱癌细胞凋亡的影响及其相关分子机制。方法:1.以UM-UC-3(雄激素受体阳性)和5637(雄激素受体阴性)两种膀胱癌细胞株为细胞模型,分别以一定浓度的比卡鲁胺(50μM)或雄激素去除处理细胞48h,阻断膀胱癌细胞AR信号通路,利用Hoechst染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;利用透射电镜观察自噬小体/溶酶体形成情况,激光共聚焦显微镜观察转染m RFP-GFP-LC3腺病毒后细胞内荧光斑点聚集情况;此外,利用Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved caspase-3和自噬特异性蛋白LC3II/I的表达情况。2.利用si RNA基因干扰技术对膀胱癌UM-UC-3细胞进行雄激素受体(Androgen Receptor,AR)沉默,以RNA转录组测序技术分析AR干扰后自噬相关基因(Autophagy-related Genes,ATGs)表达水平的变化,从中选取变化相对较明显的ATGs进行实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)验证;再次选择q RT-PCR结果中变化更加明显的基因为目的基因,利用si RNA基因干扰技术沉默该基因,以透射电镜、激光共聚焦显微镜和Western blotting技术检测该自噬基因对自噬的影响,流式细胞仪和Western blotting技术检测该自噬基因对凋亡的影响。3.分别以一定浓度的自噬抑制剂氯喹(100μM)或自噬诱导剂雷帕霉素(100 n M)和(或)比卡鲁胺(50μM Bic)处理UM-UC-3和(或)5637细胞改变其自噬活性,观察并探讨自噬水平的改变对膀胱癌细胞凋亡的影响。结果:雄激素去除或应用AR拮抗剂比卡鲁胺阻断AR信号通路后,AR阳性UMUC-3细胞凋亡和自噬水平均显著增高,而对AR阴性的5637细胞凋亡和自噬水平却无显著影响;雄激素去除和比卡鲁胺均能引起自噬相关基因uncoordinated51-like kinase 2(ULK2)的表达上调,利用特异性si RNA下调ULK2表达后,UM-UC-3细胞自噬和凋亡随之受到抑制;雷帕霉素可以增强5637细胞自噬活性,同时增加其凋亡比例。比卡鲁胺对膀胱癌UM-UC-3细胞的促凋亡作用可以被自噬抑制剂氯喹减弱,并且可以被自噬诱导剂雷帕霉素增强。结论:雄激素阻断可以通过上调自噬相关基因ULK2的表达引起膀胱癌细胞自噬水平的增高,进而促进膀胱癌细胞发生凋亡。靶向调控AR和其下游ULK2基因的表达可能为膀胱癌的治疗提供新的思路。