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目的：探讨人RecQ家族解旋酶可否作为新的白血病和乳腺癌肿瘤干细胞标志物。 方法：⑴以镍离子亲和层析方法分离纯化重组大肠杆菌菌株表达的人BLM解旋酶,鉴定BLM解旋酶纯度后,免疫Balb/c小鼠,制备抗BLM解旋酶多克隆抗体;⑵将两株分泌抗RecQ解旋酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C1、6H5细胞悬液注射到经液体石蜡预处理的Balb/c小鼠腹腔,收集腹水,制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体。⑶利用抗BLM解旋酶多克隆抗体、抗RecQ解旋酶单克隆抗体1C1和6H5,对K562,Jurkat和MDA-MB-435细胞进行免疫组化染色,连续6天动态观察,并对图像扫描分析。⑷采用无血清悬浮培养方法,对K562,Jurkat,MDA-MB-435细胞进行肿瘤干细胞筛选和培养。⑸采用荧光显微镜观察Hoechst33342染料对K562,Jurkat,MDA-MB-435肿瘤干细胞染色情况。⑹利用上述抗体对K562,Jurkat,MDA-MB-435肿瘤干细胞进行免疫组化染色和图像拍照并扫描分析。⑺对MDA-MB-435肿瘤干细胞转入有血清培养基培养诱导分化,观察是否能有分化现象。 结果：⑴提取了浓度为1.791g/L和纯度达90％的重组人BLM解旋酶。⑵制备效价可达1:16000抗BLM解旋酶多克隆抗体及抗RecQ解旋酶单克隆抗体1C1和6H5。⑶连续6天免疫组化动态分析,随着培养时间增加,与第1天相比,K562细胞的RecQ解旋酶阳性细胞百分率总体呈下降趋势,阳性颗粒积分光密度值下降,阳性颗粒平均光密度值增加,P<0.05,差异有统计学意义;Jurkat细胞的RecQ和BLM解旋酶阳性细胞百分率总体呈下降趋势,阳性颗粒积分光密度值下降,阳性颗粒平均光密度值增加,P<0.05,差异有统计学意义;MDA-MB-435细胞的BLM解旋酶阳性细胞百分率总体呈下降趋势,阳性颗粒积分光密度值下降,BLM解旋酶阳性颗粒平均光密度值增加,P<0.05,差异有统计学意义。⑷采用无血清悬浮培养方法筛选和培养K562,Jurkat,MDA-MB-435肿瘤干细胞成功。MDA-MB-435肿瘤干细胞经含血清培养基再次培养,具有分化功能。⑸Hoechst33342染料对肿瘤干细胞染色鉴定,约有90%肿瘤干细胞蓝色荧光染料较弱,呈暗淡区。⑹三株肿瘤干细胞免疫组化分析结果与第1天培养的肿瘤细胞相比,P<0.05,差异有统计学意义。 结论：RecQ家族解旋酶可能有望成为筛选肿瘤干细胞的一种标志物。