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目的:通过检测烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)在2型糖尿病中的变化及调控Nampt对胰岛p细胞的影响,探讨Nampt在2型糖尿病发病中的作用机制,为糖尿病发病机制的研究奠定基础。方法:(1)在整体研究过程中,通过制备2型糖尿病SD大鼠模型,应用免疫组化方法检测Nampt蛋白在肝脏、肾脏、骨骼肌、胰腺中的表达水平;(2)离体实验中,应用NI T-1细胞株,将培养的细胞分为四组:组1(5.6mmol/L为低糖DMEM)、组2(11.1mmol/L,常规RPMI-1640培养液)、组3(16.7mmol/L的RPMI-1640培养液加糖溶液)、组4(27.6mmol/L的RPMI-1640培养液加糖溶液),通过构建CSII-EF-MCS-IRES2-Venus/Nampt真核表达载体,并转染重组质粒至NIT-1细胞使其表达,应用免疫印迹(Western Blot)方法检测NIT-1细胞中Nampt与FoxO1表达,观察两蛋白之间表达的相互关系;放射免疫法检测Nampt转染前后胰岛素分泌的水平的变化。结果:(1)应用2型糖尿病SD大鼠的病理组织切片发现,Nampt蛋白在糖尿病大鼠的肝脏细胞中均有广泛表达,可见糖尿病组表达明显高于对照组,两者的统计学差异为p<0.05; Nampt在胰腺组织中也有表达,其表达主要分布于胰岛中,但其在糖尿病组中的表达水平明显低于正常组,其表达具有统计学差异(p<0.05);Nampt在肾脏组织中表达主要分布于肾小管和集合管中,肾小球未见有明显表达,且糖尿病与对照组无明显统计学差异(p>0.05);骨骼肌组织中Nampt表达在糖尿病与正常组均呈低度表达,且表达也无明显差异(p>0.05)。(2)将Nampt-CSII-EF-MCS-IRES2-Venus重组载体转染至胰岛NIT-1细胞中,细胞培养至24小时荧光显微镜下发现,NIT-1细胞内有绿色荧光蛋白的表达;Western Blot检测发现:Nampt基因与FoxO1基因的表达产物在转染前后表达量均有显著差异,即:转染后Nampt基因表达水平升高,而此时FoxO1基因的表达水平明显降低两者分别具有明显的显著性差异(P<0.05);放射免疫法检测胰岛素分泌显示转染后胰岛素分泌较转染前升高(P<0.05)。结论:(1)Nampt在糖尿病SD大鼠的多种组织中均有表达,其在糖尿病组肝脏组织中较正常组的表达水平较高(胰腺组织相反),肾脏和骨骼肌组织表达无显著差异,此结果为研究Nampt在2型糖尿病中的作用提供了进一步的依据。(2)在氧化应激状态下,上调Nampt基因表达可以进一步抑制FoxO1基因表达,并促进胰岛细胞增殖和胰岛素的分泌,说明在氧化应激状态下,增加细胞Nampt表达可以促进胰岛β细胞功能,从而缓解细胞对胰岛素抵抗的影响。研究结果为Nampt基因在2型糖尿病作用机制提供了科学依据。