论文部分内容阅读
目的:本实验采用实时定量PCR及蛋白免疫印迹法(Western boltting)的方法,检测盐敏感大鼠建立的高血压前期模型中,肾脏组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)介导的p38MAPK信号传导通路相关基因和蛋白的表达,主要有p38丝裂素活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)、c AMP反应元件结合蛋白(c AMP-responsive element binding protein,CREB),及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)基因的表达,探讨针刺对高血压前期大鼠延缓肾脏细胞外基质沉积的作用原理,从更深层次上理解高血压病的发生发展过程。材料与方法:本次实验按照实验目的将实验动物分为四组,分别为正常对照组,模型组,针刺组以及非经非穴组。全部实验动物为40只健康雄性大鼠,其中有30只为Dahl盐敏感大鼠(Dahl salt sensitive rats,DS),给予高盐饲料喂养后血压升高。将它们按照随机数字表法平均分为三组,每组10只,分别记为模型、针刺及非经非穴组。另外10只为Dahl盐抵抗大鼠(Dahl salt resistant rats,DR),给予高盐饲料喂养后血压基本稳定不变。将每组大鼠分笼饲养,适应性喂养7天,无异常后给予高盐饲料喂养并每天检测血压变化,待盐敏感大鼠血压升高10-20mm Hg后停止高盐喂养改为普通饲料喂养,即造模成功并开始治疗。其中模型组大鼠仅每日捆绑20min静置;针刺组针刺双侧“足三里”“曲池”穴3-5mm,接通电针20min,采用疏密波,频率以针柄轻微震颤为度,每日1次,每周6次,治疗五周;非经非穴组针刺大鼠双侧髂嵴上15mm、后正中线旁开20mm这一固定对照点,同样采用疏密波,接通电针20min,频率以针柄轻微震颤为度,治疗日期与针刺组相同。治疗时每周检测大鼠血压一次并记录。停止针刺治疗结束。取材时,捆绑固定大鼠后注射10%水合氯醛(每100g大鼠给药0.35ml),待大鼠完全麻醉后,腹部正中切口,充分暴露肾脏后切除双肾,去包膜,沿最大冠状切面纵行切开,取其中一部分肾组织做匀浆液,提取肾脏组织总RNA,采用实时定量PCR方法检测肾脏中TGF-β1、p38MAPK、CREB、FN及α-SMAm RNA的表达;用蛋白免疫印迹法检测肾脏组织中p38MAPK、CREB的磷酸化蛋白表达量。结果:1.电针对Dahl盐敏感大鼠肾组织TGF-β1基因表达的影响模型组大鼠与正常组大鼠相比,肾组织中TGF-β1基因表达升高(P<0.05)。经过五周治疗后,针刺组及非经非穴组大鼠与模型组相比,TGF-β1基因表达量均有所降低(P<0.05),与非经非穴组相比,针刺组降低明显,具有统计学意义(P<0.05)。2.电针对Dahl盐敏感大鼠肾组织p38MAPK信号通路的影响模型组大鼠与正常组大鼠相比,肾组织中p38MAPK、CREB基因表达及其磷酸化蛋白表达升高(P<0.05)。经过五周治疗后,针刺组及非经非穴组大鼠与模型组相比,p38MAPK、CREB基因表达及其磷酸化蛋白表达量均有所降低(P<0.05),与非经非穴组相比,针刺组降低明显,具有统计学意义(P<0.05)。3.电针对Dahl盐敏感大鼠肾组织α-SMA、FN基因表达的影响模型组大鼠与正常组大鼠相比,肾组织中α-SMA、FN基因表达均升高(P<0.05)。经过五周治疗后,针刺组及非经非穴组大鼠与模型组相比,α-SMA、FN基因表达均有所降低(P<0.05),与非经非穴组相比,针刺组降低明显,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.电针双侧“足三里”“曲池”穴有延缓高血压前期大鼠肾脏细胞外基质沉积的作用。2.延缓的作用机制可能与抑制TGF-β1介导的p38MAPK信号传导通路上的相关基因及磷酸化蛋白的表达有关。3.其中TGF-β1、p38MAPK、CREB、FN及α-SMA是其关键的作用点。