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背景：膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，如今临床上膀胱癌患者对常规的治疗药物Cisplatin、Pirarubicin的耐药日益严重，同时增加了药物副作用，所以深入研究其相关耐药机制有利于提高膀胱癌患者对临床药物的敏感性，更有利于提高临床治疗膀胱癌的效果。研究思路：基于相关研究报道，在基因毒力作用下，结肠癌细胞的野生型P53能诱导GPR87的表达，在干扰GPR87后结肠癌细胞对药物敏感性提高。因为GPR87在膀胱癌中高表达，由此我们可推测GPR87可能也与膀胱癌患者耐药相关，拟构建shRNA表达载体抑制GPR87在膀胱癌细胞中表达，检测能否提高膀胱癌细胞对Cisplatin、Pirarubicin药物的敏感性，减少临床药物用量，以达到提高临床治疗膀胱癌的效果。采取主要方法如下：1.通过MTT筛选出Cisplatin、Pirarubicin以及两药联合作用于BIU87、T24细胞24h，抑制率在20%-40%的两个浓度，再通过免疫荧光、Western-blot检测细胞DNA损伤指标γ-H2AX蛋白。筛选出最佳的有效损伤浓度。2.分别提取BIU87、T24细胞被Cisplatin、Pirarubicin及两种药联损伤24h后的RNA、蛋白，通过Western-blot、半定量、定量PCR分别检测P53、GPR87基因转录、蛋白水平表达变化。3.膀胱癌细胞BIU87、T24转染抑制效率最高的GPR87-1号基因，应用MTT检测两种细胞对Cisplatin、Pirarubicin和两种药物联合作用的敏感性变化，Western-blot检测两种细胞中凋亡相关蛋白P53、P21、PARP、MDM2表达变化，免疫荧光检测两种细胞的细胞核凋亡形态变化。取得实验结果与结论：1.2μg/ml Cisplatin、0.25μg/ml Pirarubicin、1μg/ml Cisplatin联合0.125μg/ml Pirarubicin分别作用BIU87细胞24h以及4μg/mlCisplatin、1μg/ml Pirarubicin、2μg/mlCisplatin联合0.5μg/mlPirarubicin分别作用T24细胞24h，均能到达有效损伤效果。筛选出的药物浓度作用BIU87、T24细胞24h后，能达到预期损伤效果。2.在BIU87细胞被Cisplatin、Pirarubicin、及两种药联有效损伤后，P53、GPR87基因的mRNA、蛋白均表达升高（P<0.05），在T24细胞被Cisplatin、Pirarubicin、及两种药联有效损伤后，P53、GPR87的mRNA、蛋白均表达无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。BIU87内细胞的野生型P53调控GPR87的表达上调。T24细胞内突变型的P53不能调控GPR87的表达。3. GPR87基因被抑制后，BIU87细胞对Cisplatin、Pirarubicin和两种药联合作用的敏感性明显提高、凋亡相关蛋白P53、P21、PARP、MDM2表达增高，有统计学意义（P<0.05）以及细胞核凋亡形态明显改变，但是T24细胞对Cisplatin、Pirarubicin和两种药联合作用敏感性没有明显差异，凋亡相关蛋白P53、P21、PARP、MDM2表达也无明显差异，无统计学意义（P>0.05）细胞核凋亡形态改变无明显差异。GPR87基因在膀胱癌细胞对Cisplatin、Pirarubicin的敏感性中发挥了重要作用。