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共振瑞利散射(RRS)方法是近几年迅速发展起来的新分析技术,因其灵敏度高、选择性好、操作简便等显著特点而备受分析工作者的关注。目前,它已广泛应用于核酸、蛋白质等生物大分子及痕量元素的测定,用于抗生素类药物的分析鲜见报道。本文研究了盐酸氯丙嗪-核酸,氨基糖苷类抗生素-核酸,阳离子表面活性剂-核酸,酸性双偶氮-氨基糖苷类抗生素和镧(Ⅲ)-四环素类抗生素等五种新体系的RRS光谱极其在核酸和抗生素测定中的应用,探讨了它们的光谱特性、影响因素、分析参数和实际应用,建立了方便、快速测定核酸和抗生素药物的新方法。其中,阳离子表面活性剂-核酸体系可用于纳克级核酸的分析;氨基糖苷类抗生素-核酸体系中,庆大霉素和卡那霉素对DNA测定具有很好的特异性,对RNA不产生响应信号;镧(Ⅲ)-四环素类抗生素体系对测定金霉素和强力霉素有很高的选择性,而结构与性能相似的四环素类其他成员如土霉素及四环素则无RRS响应,这与量子化学半经验程序计算结果一致。 一、盐酸氯丙嗪-核酸体系 在pH2-3的BR缓冲溶液中,核酸与盐酸氯丙嗪作用,产生强烈的共振瑞利散射信号,最大散射峰位于400nm。以小牛胸腺DNA为例,研究了体系适宜条件及方法的选择性。DNA浓度在0~4.0μg/mL、RNA浓度在0~8.2μg/mL范围内与散射强度成线性关系,检测限分别为7.6ng/mL(ctDNA)、11.3ng/mL(hDNA)、11.5ng/mL(sDNA)和28.4ng/mL(yRNA)。用于四个合成样的分析,准确性高,重复性好。 二、氨基糖苷类抗生素-核酸体系 在弱酸性BR缓冲溶液中,核酸与新霉素、卡那霉素、妥布霉素和庆大霉素等氨基糖苷类抗生素反应,产生强烈的共振瑞利散射信号,四种抗生素-核酸体系具有相似的RRS光谱图,最大共振峰位于470nm附近。用于核酸的测定,线性范围广(ctDNA:0-10μg/mL,yRNA:0-16μg/mL)。灵敏度高,检测限分别为ctDNA(ng/mL): 13.2(GEN),门.4(KANA),11.4(TOB),13.8(NE)巾DNA("g/mL):15石(GEN),20石(KA NAL12.4(TOB),16.speEO);yRNA(y玫mL):39*(TOB),26.7则EO)。其中,庆大霉素和 卜那霉素对DN A测定具有很好的特异性,对RNA无信号响应。用于合成样品的分 析,结果满意。 三.阳离子表面活性剂-核酸体系 在弱酸或弱碱性BR缓冲介质中,澳化十六烷基毗唆(CPB)、澳化十四烷基毗 IQ叮PB人氯化十六烷基H甲基芋铰(CDBAC人氯化十四烷基H甲基芋锁(Zeph) 和涣化十六烷基三甲馁(CTAB)与小牛胸腺 DNA和酵母 NA混合,因静电引力 及长链烷基的疏水作用而导致共振瑞利散射显著增强,最大共振峰位于470urn处。 方法对DNA测定有很高的灵敏度,五个体系检测限在6.6l.3卜g/mL之间;对RNA 测定则有较宽的线性范围,均超过 8.0卜g/mL。文中重点讨论了各体系灵敏度与阳离 于表面活性剂(*S)性质的关系:总结出g S强度与*S的浓度和分子量之间的规 律以及CS的浓度对核酸构象的影响。方法用于合成样品中核酸的测定,结果满意。 四.某些酸性双偶氮染料-氨基糖苦类抗生素体系 依文思蓝爬B卜 曲利本蓝厂BX 曲利本红oR贞滂胺天蓝OSB)等酸性双偶氮染 料在酸性条件下,与硫酸卡那霉素、硫酸新霉素、硫酸庆大霉素和硫酸妥位霉素等 氨基糖昔类抗生素形成离子缔合物,从而产生强烈的共振瑞利散射信号,最大散射 山5别< 】 400urn(TR)、360urn(EB)及370urn(TB和 PSB)。线性范围 0-6*卜g/mL, 此测限14.4习6.sngimL。四种染料用于测定抗生素,TR-抗生素体系灵敏度最高;对 厂十忡11染料,测定灵敏度从高到低的顺序依次为 KANA>NEOtoTOBDeGEN。用于 小W仇牛素注射液或滴耳液分析,获得满意结果。 IL.卜才’-凹环素类抗生素分析 在弱碱性TriS-HCI缓冲溶液中,三价金属谰离子与金霉素aTC\ 强力霉素 (DOTC)牛成稳 定六元螫合物,产生RRS增强,特征峰位于450urn(CTC-La卜)、 422fill(JOI”C-l。1’)。义敏)XI:J达(X10“’lllol/L)7刀(DOTC)和 8.3(CTC)。方i上 刘测定金离素和强力霉素有特异性,砌结构和性能相似的四环素族其他药物如四环 索门”C) 及上霉素(0*C)对分析不干扰。这与量于化学半经验程序(*MI)计 削吉果·致。山此建立测定上;述药物的高选择性、高灵敏度axs法,用于合成样 ,认中**C汝***C的测定,结果满意。