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目的：通过建立再生障碍性贫血小鼠模型,采用流式细胞术和RT-PCR等技术,研究补虚活血清热法(再生复血汤)对再障模型小鼠外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞百分比、CD3+CD8+细胞毒性T细胞百分比及抑制性细胞因子IL-10,TGF-β1释放的影响,以探讨再生复血汤干预再生障碍性贫血的可能作用机制。方法：将72只BALB/C正常小鼠随机分成空白组、模型组、阳性对照组、再生复血汤低剂量组(低剂量组)、再生复血汤中剂量组(中剂量组)、再生复血汤高剂量组(高剂量组),每组各12只。除空白组外,其余各组予腹腔注射环磷酰胺、氯霉素及Co-丫放射建立再障小鼠模型。造模第7天,低剂量组、中剂量组、高剂量组予再生复血汤干预,阳性对照组予环孢素干预,空白组和模型组予生理盐水干预,共给药28天。每组又分为0、7、35天三个时间点,0、7天通过小鼠断尾采血,全自动血细胞分析仪检测第0、7、35天各组内小鼠外周血血象变化；第35天处死小鼠后在显微镜下观察骨髓巨核细胞数目,流式细胞术检测外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞和CD3+CD8+细胞毒性T细胞百分比,ELISA检测血清子IL-10,TGF-β1浓度,RT-PCR检查外周血单个核细胞Foxp3mRNA表达水平。结果：1.造模方法可行性分析：造模第0、7天各组内小鼠外周血血象变化,造模第7天与第0天比较,模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,外周血三系及网织红细胞(WBC、Ret、Hb、PLT)下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。第7天,以上各组外周血三系及网织红细胞比较,差异有统计学意义,提示本实验通过环磷酰胺、氯霉素及Co-丫可以建立小鼠再障模型,各组间及组内比较具备各自可比性。2.组内比较：造模第35天(表3),高中低剂量组、阳性对照组较第7天(表2)血象三系及网织红细胞均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。说明再生复血汤阳性对照组及高中低剂量均能显著提升再障小鼠血象三系及网织细胞的数值。模型组第35天较第7天,血象三系及网织红细胞无变化(表1),说明再障小鼠模型可维持35天,直至实验结束。组间比较：造模第35天(表3),模型组较空白组,血象三系及网织红细胞均降低,差异有统计学意义(P<0.05)；高中低剂量组、阳性对照组较模型组,血象三系及网织红细胞均升高,差异有统计学意义(P<0.05)；低剂量组较阳性对照组及中高剂量组,血象三系及网织红细胞仍偏低,差异有统计学意义(P<0.05)；中剂量组与阳性对照组,血象三系及网织红细胞比较,差异无统计学意义(P>0.05),中剂量组较高剂量组,血象三系及网织红细胞仍降低,差异有统计学意义(P<0.05)；高剂量组较阳性对照组、低剂量组及中剂量组,血象三系及网织红细胞升高,差异有统计学意义(P<0.05)。提示低中高剂量组均能改善AA小鼠,外周血三系指标且与剂量呈正增长关系。3.造模第35天(表4),模型组较空白组,骨髓有核细胞增生极度低下,差异有统计学意义(P<0.05)高中低剂量组、阳性对照组较模型组,骨髓有核细胞增生活跃,差异有统计学意义(P<0.05)；低剂量组较阳性对照组及中高剂量组,骨髓有核细胞增生偏低,差异有统计学意义(P<0.05)；中剂量组较阳性对照组,骨髓有核细胞增生无差异,无统计学意义(P>0.05),中剂量组较高剂量组,骨髓有核细胞增生低下,差异有统计学意义(P<0.05)；高剂量组较阳性对照组、低剂量组及中剂量组,骨髓有核细胞增生活跃,差异有统计学意义(P<0.05)。提示低中高三组剂量组均能改善骨髓造血功能,且与剂量呈正增长关系。4.与空白组相比,模型组再障小鼠CD3+CD8+Tcell/PBMC比例升高,CD4+CD25+CD127一Treg/CD4+Treg比例下降,FOXP3-mRNA表达及IL-10及TGF-p浓度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,低剂量组CD3+CD8+Tcell/PBMC比例下降,CD4+CD25+CD127-Treg/CD4+Treg比例上升,FoxP3-mRNA表达及IL-10及TGF-p浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05)但与阳性对照组相比,低剂量组CD3+CD8+Tcell/PBMC比例较高,CD4+CD25+CD127一Treg/CD4+Treg比例较低,FOXP3-mRNA表达及IL-10及TGF-p浓度较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与阳性对照组相比,中剂量组无差异,无统计学意义(P>0.05)。与中剂量组和阳性对照组相比,高剂量组低剂量组CD3+CD8+Tcell/PBMC比例下降,CD4+CD25+CD127-Treg/CD4+Treg比例升高,FoxP3-mRNA表达及IL-10及TGF-p浓度上升,差异有统计学意义(P<0.05)。(表5、6、7)说明造模后再障小鼠外周血CD3+CD8+细胞毒性T细胞比例升高,CD4+CD25+CD127-Treg比例下降,但经低中高剂量的再生复血汤干预后其外周血CD3+CD8+细胞毒性T细胞比例下降显著,CD4+CD25+CD127一Treg比例升高,FOxP3-mRNA表达及相关抑制性细胞因子的浓度升高。结论：1、通过环磷酰胺、氯霉素及γ-射线造模可建立小鼠再障模型。2、再生复血汤可提高再障小鼠外周血象WBC数、Hb浓度、PLT及网织红细胞数,促进再障小鼠血象恢复。且再生复血汤中、高剂量优于低剂量,且与剂量呈正增长关系。3、再生复血汤可提高再障小鼠骨髓有核红细胞、成熟中性粒细胞、巨核细胞百分比,促使其骨髓造血恢复。且再生复血汤中、高剂量优于低剂量,且与剂量呈正增长关系。4.再生复血汤能通过促使CD4+CD25+CD127-调节性T细胞Fxop3mRNA表达引起再障小鼠外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞百分比增高,使得其分泌的抑制性细胞因子IL-10和TGF-p1含量增多,导致CD3+CD8+细胞毒性T细胞百分比减少,从而减少其对骨髓造血干细胞的免疫损伤,促使骨髓各系细胞造血恢复。