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心脏骤停是心脏搏动的突然终止,引起全身器官缺血缺氧及功能障碍,是临床上常见的紧急事件。尽管CPR技术在不断改善,但心脏骤停的死亡率仍居高不下。复苏后心功能不全是自主循环恢复后早期死亡的主要原因,因此如何恢复心脏骤停的泵血功能,改善复苏后心肌损伤的程度,是降低心肺复苏后死亡率的关键因素。参附注射液是临床上用于抢救的常用中成药,具有益气温阳,回阳救逆的功效。近年来大量基础实验证实参附注射液对治疗缺血再灌注损伤具有明显的疗效,故本研究通过动物实验并对其组织进行生物学分析,证明参附注射液可改善窒息合并冰氯化钾诱导的心脏骤停大鼠复苏后的心肌损伤,主要研究内容和实验结果如下:目的:通过观察参附注射液对氧化应激相关通路Nrf2/HO-1轴的调节作用,从分子水平探讨参附注射液改善大鼠复苏后心肌损伤的机制。方法:40只雄性SD大鼠,随机抽取30只大鼠进行窒息合并冰氯化钾诱导心脏骤停处理,五分钟后给予心肺复苏等一系列治疗措施,待自主循环恢复后随机分为三组,每组10只:正常复苏组在复苏成功后1h和早九晚五注射生理盐水1ml/次;参附2ml/kg组:在复苏成功后1h注射参附注射液2ml/kg,早九晚五注射参附注射液2ml/kg;参附7ml/kg组:在复苏成功后1h注射参附注射液7ml/kg,早九晚五注射参附注射液7ml/kg。另外10只作为假手术组:只进行气管插管及动静脉置管处理,操作完成后1h及早九晚五注射生理盐水1ml/次。24h后取材,检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,分析心脏骤停心肺复苏后心肌损伤程度;TBA法检测氧自由基丙二醛(MDA)水平、WST-1法检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力,判断心脏骤停后心肌氧化应激水平;Western Blot检测Nrf2、p-Nrf2、HO-1蛋白表达水平,实时荧光定量分析(RT-PCR)检测HO-1 mRNA、NQO1 mRNA表达;免疫荧光观察心肌组织细胞核内p-Nrf2蛋白的荧光表达。结果:1.血清心肌酶比较结果显示,复苏成功后24h,正常复苏组CK-MB水平高于假手术(P<0.01)、正常复苏组cTnI水平高于假手术组(P<0.01);参附注射液2ml/kg组CK-MB水平与正常复苏组相比降低(P=0.03)、参附注射液2ml/kg组cTnI水平与正常复苏组相比降低(P=0.001);参附注射液7ml/kg组较参附注射液2ml/kg组CKMB水平有所降低(P=0.011)、参附注射液7ml/kg组较参附注射液2ml/kg组cTnI水平下降(P=0.039)。2.氧化应激指标检测结果显示,正常复苏组SOD活力低于假手术组(P<0.01)、参附注射液2ml/kg SOD活力高于正常复苏组(P=0.023)、参附注射液7ml/kg组SOD活力高于参附注射液2ml/kg(P=0.0445);正常复苏组MDA水平高于假手术组(P<0.01)、参附注射液2ml/kg组MDA水平低于正常复苏组(P<0.01)、参附注射液7ml/kg组MDA水平低于参附注射液2ml/kg(P=0.031)。3.Western Blot结果显示,造模成功24h后,正常复苏组与假手术比较,大鼠心肌组织细胞质Nrf2表达量明显升高(P=0.041)、HO-1的表达量也明显升高(P<0.01),表明造模成功24h时大鼠心肌组织中的Nrf2信号通路被激活,并启动了下游信号分子HO-1的转录,但p-Nrf2较假手术组无明显差异,但有上升趋势(P=0.07),这可能与样本量不足有关。同时,与模型组比较,参附注射液2ml/kg组心肌组织中细胞质Nrf2蛋白表达明显升高(P=0.036)、p-Nrf2蛋白表达升高(P=0.003)、HO-1表达明显升高(P=0.001),说明参附注射液可升高心脏骤停心肺复苏后大鼠心肌组织中Nrf2、HO-1和p-Nrf2蛋白的表达;参附注射液7ml/kg组较参附注射液2ml/kg组细胞质Nrf2蛋白表达升高(P=0.046)、p-Nrf2蛋白表达明显升高(P=0.002)、HO-1蛋白表达也明显升高(P=0.009),表明高剂量组较正常剂量组效果更优。说明心脏骤停/心肺复苏后心肌组织因缺血缺氧性损伤而激活了氧化应激反应,而参附注射液可能会通过调节Nrf2/HO-1信号通路影响氧化应激水平发挥保护心肌组织的作用,且高剂量组优于正常剂量组。4.实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组相比,心脏骤停大鼠心肌组织HO-1mRNA相对表达水平升高(P=0.048)、NQO1mRNA的相对表达水平升高(P=0.044);与模型组比较,参附注射液2ml/kg组心肌组织中HO-1mRNA相对表达水平明显上调(P=0.001)、NQO1mRNA的相对表达水平升高(P=0.047);参附注射液7ml/kg组较参附注射液2ml/kg组HO-1 mRNA表达水平升高(P=0.006)、NQO1mRNA的相对表达水平升高(P=0.041)。5.免疫荧光分析结果得出,假手术组细胞的p-Nrf2蛋白主要在细胞质中表达;在心脏骤停/心肺复苏后p-Nrf2部分转移至细胞核中;参附注射液进行干预后细胞核中p-Nrf2蛋白的表达明显增加,且呈高剂量组优于正常剂量组。结论:参附注射液可有效减轻窒息合并冰氯化钾导致的心脏骤停大鼠模型的心肌损伤程度,其保护作用可能与抗氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1的表达有关。