论文部分内容阅读
目的:通过观察益气养阴方延缓肺癌高危肺结节发展的临床疗效和对人肺癌细胞增殖的影响及机制,结合观察益气养阴中药对于小鼠肺癌的化学预防作用,以期揭示中医益气养阴法对于早期肺癌发生发展的预防作用及机理。方法:临床研究:纳入86例中医辨证为气阴两虚型的肺结节(包括磨玻璃结节)患者开展前瞻随机对照临床研究,按1:1比例随机分为治疗组(43例)和对照组(43例)。治疗组予以口服中药益气养阴方,疗程为6个月,随访2年,对照组为同期不干预患者。以肺结节大小及密度、生存质量FACT-L量表、中医症状及证候、体力状况评分等方面的变化为观察指标来判别临床疗效。采用电化学发光法检测治疗前后肿瘤指标CEA、NSE、CYFRA21-1等水平变化;采用流式细胞仪检测治疗前后T细胞亚群CD3、CD4及CD8的百分率及CD4/CD8等水平变化;采用ELASA法检测治疗前后细胞因子TGF-β、VEGF水平变化,从而观察益气养阴方对患者肿瘤指标及免疫功能的影响。动物实验研究:40只适龄雌性A/J小鼠,予以腹腔注射苯并芘(B[a]P)后,30只小鼠按1:1比例随机分为治疗组和对照组,每组各15只。治疗组予以益气养阴核心药物金复康口服液0.5ml,对照组予以生理盐水0.5ml灌胃每日一次。每周观察记录小鼠体重的变化,以便观察药物安全性,及时调整给药剂量。给药18周后处死小鼠,比较两组小鼠肿瘤发生个数(N)及体积(V)之间的差异;其余10只小鼠在18周后随机分为治疗组和对照组,每组5只,分别予以金复康0.5ml及生理盐水0.5ml灌胃每日一次。给药5天后处死小鼠,并采用免疫组化法(IHC)检测两组小鼠肺部肿瘤组织细胞增殖及凋亡蛋白表达的差异。细胞实验研究:采用MTS法检测益气养阴方对人肺癌细胞A549(p53野生型)及H1299(p53缺失型)细胞增殖的影响;采用Western Blotting法检测益气养阴方对于A549及H1299细胞AKT/NF-κB信号传导相关蛋白及其磷酸化、A549细胞p53蛋白表达的影响;采用RT-PCR法检测益气养阴方对于A549细胞p53及其下游靶基因表达的影响。结果:临床研究:(1)肺结节大小及密度变化上,治疗后6月及24月两次评价中,治疗组对于延缓肺结节生长的总体疗效高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)生存质量FACT-L量表评分变化上,治疗组治疗后在生理状况、社会/家庭状况、情感状况、功能状况、肺癌特异症状各个领域积分与对照组比较,均有明显改善,且差异有统计学意义(P<0.01);治疗组治疗后与治疗前相比较,在生理状况、情感状况领域积分及总分上有提高,差异有统计学意义(P<0.01);对照组治疗后与治疗前相比较,功能状况领域积分出现下降,其他领域积分则均有提高,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组治疗后与对照组比较,在FACT-L量表总分疗效改善上有差异,且差异有统计学意义(P<0.01)。(3)中医证候改善及症状变化上,气阴两虚证候的总有效率治疗组为83.33%,高于对照组的53.66%,差异具有统计学意义(P<0.05)。在症状变化上,治疗组治疗后对于咳嗽、咯痰、气短、自汗盗汗症状改善与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而对于神疲乏力、口干咽燥症状的改善,治疗组与对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);(4)对肿瘤指标NSE的影响上,治疗组治疗后NSE水平较治疗前降低,对照组则出现NSE升高,治疗组治疗后NSE水平与对照组相比降低,但差异均没有统计学意义(P>0.05)。(5)对细胞因子TGF-β的影响上,治疗组治疗后TGF-β水平较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组与对照组相比降低,差异有统计学意义(P<0.05);对照组治疗后TGF-β水平较治疗前升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。动物实验研究:(1)金复康治疗组的小鼠肺肿瘤平均发生个数较对照组下降33%,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)金复康治疗组的小鼠肺肿瘤平均体积较对照组下降46%,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)金复康治疗组的肿瘤凋亡蛋白Caspase-3平均表达率较对照组上升213.54%,经统计学分析,差异具有统计学意义(P<0.01)。细胞实验研究:(1)益气养阴方可呈剂量依赖性地抑制人肺癌细胞A549及H1299细胞增殖,IC50值分别为0.22g/ml和0.15g/ml;(2)益气养阴方可通过抑制A549细胞AKT及其磷酸化蛋白、下游磷酸化IKKα/β以及磷酸化NF-κB蛋白的表达,抑制肺癌细胞增殖,而对于H1299细胞相应蛋白的抑制作用则不明显;(3)益气养阴方可促进A549肺癌细胞p53基因及下游BAX、Bim、Puma基因的表达。结论:(1)益气养阴方具有延缓肺癌高危肺结节发展及早期肺癌发生的潜在作用。(2)益气养阴方能够提高患者生存质量,改善中医证候及临床症状,具有较好的疗效。(3)益气养阴方可能通过对细胞免疫因子TGF-β水平的调控,起到延缓肺癌高危肺结节发展及早期肺癌发生的作用。(4)益气养阴方可通过p53依赖AKT/NF-κB信号传导抑制人肺癌细胞增殖。(5)益气养阴中药具有促进肿瘤凋亡蛋白表达,预防小鼠肺癌发生的作用。(6)中医对于肺癌的预防,益气养阴法可作为有效治则之一,也为肺癌预防提供了一种治疗方法。