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目的:根据肝纤维化中医发病病机特点,分别观察和评价益气活血法、清化瘀毒法及两种治法的复法对于四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型的干预作用,进一步研究和探讨其作用机制,为临床运用益气活血法、清化瘀毒法及其复法治疗肝纤维化提供一定的理论依据。方法:实验一:将64只SD大鼠随机分为正常对照组(空白组,A组)、模型对照组(B组)、秋水仙碱组(C组)、丹参组(D组)、黄芪组(E组)、丹参黄芪按1:1配比复方组(F组),丹参黄芪按1:2配比复方组(G组),丹参黄芪按2:1配比复方组(H组),其中B-H组通过腹腔注射四氯化碳橄榄油制成肝纤维化大鼠模型,完成造模后,C-H组分别给予秋水仙碱、丹参颗粒剂、黄芪颗粒剂灌胃,复方制剂组分别给予丹参:黄芪按照1:1比例剂量灌胃,丹参:黄芪按照1:2比例剂量灌胃,丹参:黄芪按照2:1比例灌胃。干预4周后收集血清和肝组织标本,运用生化分析仪检测大鼠肝功能、肝纤维化指标。免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白和I型胶原蛋白,荧光定量PCR检测TGF-β1,Smad2,β-catenin,Cyclin D1mRNA水平,Western-blot检测TGF-β1,Smad2,β-catenin,Cyclin D1蛋白含量。实验二:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(空白组)、模型对照组、秋水仙碱组、紫七软肝颗粒低剂量组(0.3375g/kg)、紫七软肝颗粒中剂量组(0.675g/kg)和紫七软肝颗粒高剂量组(1.35g/kg)。除正常组外,其余各组通过腹腔注射四氯化碳橄榄油制成肝纤维化大鼠模型,完成造模后,分别给予药物干预,4周后收集血清和肝组织标本,运用生化分析仪检测大鼠肝功能、肝纤维化指标、氧化应激指标SOD、HYP和MDA的水平,Western-blot检测TGF-β1,Smad2,p-Smad2蛋白含量。实验三:将64只SD大鼠随机分为正常对照组(空白组)、模型对照组、秋水仙碱组、加味紫七软肝颗粒低剂量组(0.506g/kg)、加味紫七软肝颗粒中剂量组(1.0125g/kg)和加味紫七软肝颗粒高剂量组(2.025g/kg)。除正常组外,其余各组通过腹腔注射四氯化碳橄榄油制成肝纤维化大鼠模型,完成造模后,分别给予药物干预,4周后收集血清和肝组织标本,运用生化分析仪检测大鼠肝功能、肝纤维化指标、SOD、HYP和MDA的水平,荧光定量PCR检测大鼠肝脏组织lnc-LFAR1,TGF-β1,Smad2,p-Smad2mRNA含量,Western-blot检测大鼠肝脏的TGF-β1,Smad2,p-Smad2蛋白含量。结果:实验一:与B组比较,各中药组肝功能指标中ALT、ALP及肝纤维化指标下降明显(P<0.05),优于西药对照组,但中药组组间无差异。与B组比较,E组和F组α-SMA和colI表达最少。荧光定量PCR检测显示,与B组比较,F、G组TGF-β1下降明显(P<0.05),各组Cyclin D1均明显下降(P<0.05)。Western-blot结果显示,各治疗组的Cyclin D1下降显著(P<0.05);C组TGF-β1、β-catenin下调效果优于多数中药组(P<0.05),但与F组疗效相当;各中药治疗组组间疗效无显著差异。实验二:与模型组比较,各中药治疗组肝功能指标均显著下降(P<0.05),各组间无显著差异。与模型组比较,各治疗组肝纤维化各项指标均下降(P<0.05),各中药组间无显著差异。与模型组比较,各中药组氧化应激指标均显著改善(P<0.05),不同剂量中药组组间疗效比较无差异。与模型组比较,各中药治疗组TGF-β1、β-Smad2降低明显(P<0.05),但组间没有差异。实验三:与模型组比较,各治疗组肝功能主要指标均明显下降(P<0.05);与秋水组比较,加紫高组ALT、AST明显下降(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组肝纤维化各项指标均下降(P<0.05);与秋水组比较,加紫高组各项肝纤维化指标均明显下降(P<0.05);加紫中组PⅢP、IVC较秋水组明显下降(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组SOD下降,MDA、HYP均升高(P<0.05);与秋水仙碱相比,加紫高组SOD升高明显(P<0.05)。荧光定量PCR结果显示,与模型组比较,加紫中组、加紫高组lnc-LFAR1显著降低(P<0.05);各治疗组TGF-β1均显著降低(P<0.05);秋水组、加紫中组、加紫高组Smad2显著降低(P<0.05);秋水组、加紫中组、加紫高组P-Smad2显著降低(P<0.05)。Western-blot检测结果显示,各治疗组TGF-β1、p-Smad2下降明显(P<0.05);加紫高组、加紫中组Smad2下降明显(P<0.05)。结论:1.益气活血法可以显著降低ALT、ALP及肝纤指标,降低TGF-β1、Smad2、β-catenin和Cyclin D1的表达水平,以1:1比例复方制剂疗效最佳,提示益气与活血药物等剂量配比疗效最优,且益气活血法对于改善肝纤指标疗效显著。2.清化瘀毒法可以改善肝纤维化大鼠的肝功能、肝纤指标,增强其抗氧化能力,还能显著降低大鼠肝脏TGF-β1、p-Smad2蛋白的表达,进而阻断TGF-β/Smad信号通路,对抗肝纤维化,与西药对照组疗效相当,其中尤其对于肝功能指标疗效显著。3.益气活血联合清化瘀毒法对肝功能指标、肝纤指标及氧化应激指标均有较好疗效,其中高剂量组对部分指标的疗效甚至优于西药对照组秋水仙碱。同时实验还发现益气活血联合清化瘀毒法可下调lnc-LFAR1的表达,进而使TGF-β/Smad通路上相关细胞蛋白表达也呈现下降,提示中药可能通过作用于lnc-LFAR1来干预TGF-β/Smad通路,为进一步研究中药对肝纤维化的治疗寻找新的靶点。