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本论文以肌肽对映体为研究对象,应用高效液相配体交换手性固定相法和柱前衍生化法,建立了肌肽对映体拆分方法,并对其拆分机制进行了探讨。制定了L-肌肽原料药光学纯度的质量控制方法。研究了肌肽对映体在大鼠体内的立体选择性药动学特征,研究了L-肌肽和N-乙酰-L-肌肽滴眼液家兔房水药动学特征。建立了大鼠心肌中内源性物质L-肌肽浓度的测定方法,并对正常大鼠与糖尿病病理模型大鼠心肌中L-肌肽的浓度进行比较,为L-肌肽的临床应用提供了依据。1.高效液相色谱配体交换手性固定相法拆分肌肽对映体采用Phenomenex chirex 3126手性配体固定相和硫酸铜手性配体流动相,对肌肽对映体进行拆分。考察了流动相组成、流速、柱温和Cu2+浓度等因素的肌肽色谱拆分行为和热力学特性,并对其拆分机制进行初探。经优化确定的色谱条件如下：流动相为乙腈：2 mmol·L-1硫酸铜(4：96,v／v),流速为1.0 mL·min-1,柱温为35℃,检测波长为285 nm。在此条件下,肌肽对映体得到很好的分离,分离度大于3。2.高效液相色谱手性衍生化法拆分肌肽对映体应用邻苯二甲醛/N-乙酰基-L-半胱氨酸(OPA／NAC)为手性衍生化试剂,采用柱前衍生化反相高效液相色谱-荧光检测法,将肌肽对映体转化为非对映体后,在普通C18反相色谱柱上实现分离。考察了不同衍生化反应条件和色谱条件下对肌肽对映体拆分的影响。结果表明,以无水乙醇和pH 9.8硼酸缓冲液为溶剂,当邻苯二甲醛(OPA)和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的摩尔比为1：2时,室温下避光反应5 min为最佳的衍生化条件；色谱条件：流动相为甲醇-50 mmol·L-1醋酸铵缓冲溶液(30：70,v／v),流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,λex=350 nm,λem=450 nm。肌肽对映体衍生物达到基线分离。该方法成功应用于L-肌肽原料药的光学纯度检查,结果表明：L-肌肽原料药中D-肌肽含量小于0.5%,符合有关规定。3.大鼠血浆中肌肽立体选择性药物动力学建立了以OPA／NAC为手性衍生剂的柱前衍生化反相高效液相色谱-荧光检测法。分别灌胃给予大鼠L-肌肽、D-肌肽和肌肽消旋体后,测定血浆中对映体的药物浓度。其中灌胃给予大鼠L-肌肽后,主要药动学参数Cmax为5396±258 ng·mL-1,AUC0-t和AUC0-∞分别为5543±459和5641±448 ng·h·mL-1,T1／2为1.27±0.37 h；给予大鼠D-肌肽后,主要药动学参数Cmax为1958±192 ng·mL-1,AUC0-t和AUC0-∞分别为6077±288和6160±277 ng·h·mL-1,T1／2为1.45±0.11 h；给予大鼠肌肽消旋体后,L-肌肽的主要药动学参数Cmax为5344±122 ng·mL-1,AUC0-t和AUC0-∞分别为5222±224和5306±241ng·h·mL-1,T1/2为1.43±0.01 h,D-肌肽的主要药动学参数Cmax为1914±169 ng·mL-1,AUC0-t和AUC0-∞分别为6227±708和6321±739 ng·h·mL-1,T1/2为3.37±0.17 h。结果表明：L-肌肽和D-肌肽在大鼠体内药动学具有高度的立体选择性,L-肌肽是大鼠体内吸收代谢的优势构型。肌肽酶的作用也表现出立体选择性,这与文献报道L-肌肽是肌肽酶的作用底物相一致。氨基酸消旋酶对L-肌肽和D-肌肽均不存在单向转化。4.L-肌肽与N-乙酰-L-肌肽滴眼液家兔房水药物动力学利用微渗析取样技术,采用UPLC／MS／MS检测方法对L-肌肽和N-乙酰-L-肌肽在家兔房水内药动学进行研究。色谱条件：乙腈-0.2%甲酸溶液(10：90,v／v),流速为0.2mL·min-1,柱温30℃。L-肌肽主要药动学参数Cmax为1802±588 ng·mL-1,AUC0-t和AUC0.∞分别为1220±423和1337±381 ng·h·mL-1,T1／2为1.02±0.55 h。N-乙酰-L-肌肽主要药动参数Cmax为2305±135 ng·mL-1,AUC0-t和AUC0-∞分别为1794±334和1891±342ng·h·mL-1,T1/2为1.19±0.42 h。L-肌肽和N-乙酰-L-肌肽具有很好的角膜透过性,在眼部局部用药后可以被迅速吸收进入房水,达峰时间不到10min,展现出良好的眼部应用前景。相对于L-肌肽,N-乙酰-L-肌肽的AUC0-∞值是其1.4倍,显示了更好的生物利用度。5.高效液相色谱对大鼠心肌内源性L-肌肽浓度的测定建立用于测定大鼠心肌内源性L-肌肽浓度的HPLC-UV方法。采用NH2色谱柱,流动相为：乙腈-磷酸盐缓冲液(32 mmol·L-1磷酸二氢钾-6mmol·L-1磷酸氢二钾-0.05%氨水)(55：45,v／v),流速1.0 mL·min-1,柱温40℃,检测波长210 nm。采用所建立方法研究正常大鼠与糖尿病大鼠心肌中L-肌肽的浓度。结果表明,糖尿病大鼠心肌中的L-肌肽浓度较正常大鼠心肌中L-肌肽浓度明显下降(P<0.05)。本研究结果为临床上糖尿病性心肌病的诊断和防治,提供了依据。