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目的:各型巨噬细胞在不同微环境中的功能状态目前尚不完全清楚,本课题比较研究CD163/TWEAK/Fn14途径对M1及M2型巨噬细胞NF-κB的差异表达。方法:提取APOE-/-小鼠腹腔巨噬细胞,分别诱导分化为M1(CD68+/iNOS+/CD163-)及M2(CD68+/CD163+/iNOS-)型巨噬细胞并经激光共聚焦显微镜证实后进行以下研究:分别在M1及M2型巨噬细胞中加入外源性的重组CD163及TWEAK蛋白质,并以siCD163、siTWEAK及其同型对照(isotype)为对照组,通过免疫印迹法检测并计算各靶蛋白/β-actin的比值,以比较分析各组细胞中CD163、TWEAK、Fn 14的蛋白质表达差异,及其可能的下游炎症因子NF-κB的表达情况,以明确CD163可否通过调节TWEAK/Fn 14途径影响NF-κB的水平。结果:①激光共聚焦显微镜证实,腹腔提取巨噬细胞为M1 型(CD68+/iNOS+/CD163-),可由地塞米松刺激诱导后发生表型转化为M2型(CD68+/CD163+/iNOS-)。②在 M1 细胞中,与 M1+isoCD163 组相比(0.7786 ±0.05344),M1+CD163(0.5036±0.03109)组 TWEAK 的蛋白质表达水平显著降低(P=0.004);与同型对照组相比,当沉默或用TWEAK刺激,Fn 14蛋白质水平无变化;③在M2巨噬细胞中,与M2+isoCD 163组相比,M2+CD163组CD 163水平显著升高(P=0.0007),M2+siCD163组CD163水平显著降低(P=0.0010),说明CD163沉默模型有效;与M2+isoCD163(0.9436±0.05592)组相比,M2+CD163(0.6670±0.03413)组TWEAK的蛋白质表达水平显著降低(P=0.0055),但CD163可能不直接调节Fn14的蛋白质表达(M2+isoCD163 VS M2+CD163,P=0.08),但沉默CD163后,Fn14的蛋白质水平显著增加(P=0.0041);④在M2巨噬细胞中加入TWEAK或siTWEAK后,与同型对照组相比,CD163及Fn 14的蛋白质表达水平均无变化,说明TWEAK未调节CD163和Fn 14表达;⑤在M1细胞中无论用CD163刺激还是沉默CD163,与同型对照组相比,NF-κB的水平均无明显变化(P=0.1183 和 P=0.051)。与 isoTWEAK 组(0.6777±0.07908)相比,沉默 TWEAK(0.4015±0.05787)组 NF-κB 水平显著降低(P=0.0304);⑥在 M2 巨噬细胞中,当沉默 CD163(1.509 ±0.1 246)后,与 isoCD163(0.9861±0.0444)组相比,NF-κB水平显著增高(P=0.0075);在M2巨噬细胞中加入TWEAK(1.402±0.0262)或沉默 TWEAK(0.6011±0.0293),与同型对照组(0.8501±0.0763)相比,可显著影响NF-κB水平;⑦分别用CD163、siTWEAK、CD163+siTWEAK、isoTWEAK刺激M1巨噬细胞,结果显示,TWEAK可逆向下调 CD163,与 M1+isoTWEAK 组相比,M1+CD163 组及 M1+CD163+siTWEAK组的NF-κB表达明显降低,但M1+CD163组及M1+CD163+siTWEAK组的NF-κB表达无差异。⑧将M2巨噬细胞用M2+oxLDL孵育后再用CD163刺激,显著下调TWEAK及NF-κB的蛋白质表达。将M2巨噬细胞用M2+oxLDL孵育后再用TWEAK刺激,CD163水平有下降趋势,M2+oxLDL+siTWEAK组的CD163升高;而且TWEAK显著上调M2+oxLDL细胞的NF-κB表达。结论:①在M1巨噬细胞中,外源性CD163显著下调TWEAK水平;用外源性TWEAK刺激M1巨噬细胞,其经典配体Fn 14无变化,故Fn 14不参与M1巨噬细胞CD163/TWEAK调节途径;沉默TWEAK可使NF-κB水平下调,故TWEAK可直接调节NF-κB的表达,而CD163对NF-κB无直接调节作用。②无论对地塞米松诱导的CD163阳性M2巨噬细胞用TWEAK刺激还是沉默TWEAK,CD163和Fn14的蛋白质水平均无变化,提示M2可能具有天然的抗TWEAK诱导的炎症反应特征。③沉默M2巨噬细胞的CD 163后,NF-κB的蛋白质水平显著增加,且TWEAK具有正性调节NF-κB表达的作用(加入TWEAK或沉默TWEAK时,NF-κB的蛋白质水平显著增加或降低)。④在动脉粥样硬化的微环境下,CD163可调节TWEAK及NF-κB水平,可能发挥抗动脉粥样硬化的作用,而且CD163需通过TWEAK调节NF-κB表达,而不能直接作用于NF-κB。总之,CD163/TWEAK/NF-κB途径可调节M1及M2巨噬细胞的生物学活性,提示可能成为动脉粥样硬化治疗的新靶点。