IL-8对中性粒细胞在STEMI冠脉内血栓形成中的作用研究

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背景:炎症和氧化应激在动脉粥样硬化斑块不稳定中起关键作用,粥样硬化斑块的破裂或侵蚀及随后的血栓形成是造成冠脉血管闭塞和急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)的主要机制。斑块的破裂触发了最初的血小板聚集体的形成,血小板聚集体随着纤维蛋白形成的增加而增长,导致持续的冠脉血流阻断及血栓形成。白介素-8(IL-8)是一种细胞炎性因子,与动脉粥样硬化和急性冠脉综合征的发病机制有关,据报道,急性心肌梗死患者血清IL-8水平明显升高。中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在宿主防御感染中起着重要作用,但是NETs也可作为激活血小板和凝血的网状支架,促进血栓的形成;研究已证实在人的静脉血栓中存在NETs,其有促进静脉血栓形成的作用。因此,我们猜想SETMI冠脉血栓中是否也存在NETs,急性心肌梗死患者血清升高的IL-8是否参与NETs的形成。目的:探索STEMI冠脉血栓中是否存在NETs;心肌梗死血清中的IL-8与NETs形成的相关性,为STEMI的抗栓治疗提供新的思路及方向。方法:收集河南大学淮河医院心内科2018年5月—2019年10月收治的因STEMI在起病12 h内接受急诊PCI并行血栓抽吸的30例患者血清及冠脉内血栓和30例健康志愿者的外周血;对收集的19例冠脉内血栓标本制作为冰冻切片,行HE染色、免疫荧光染色;应用ELISA法测定STEMI患者及志愿者血清中NETs的表达量;分离志愿者外周血中性粒细胞,用STEMI血清刺激3h后行流式细胞检测、免疫荧光染色观察NETs的表达量;在STEMI血清中加入anti-IL-8单克隆抗体后刺激中性粒细胞,行流式细胞检测观察NETs的表达量的变化;在正常血清中加入IL-8后刺激中性粒细胞,行流式细胞检测观察NETs的表达量的变化。结果:冠脉血栓标本的HE染色可见血栓中散在中性粒细胞,血栓标本的免疫荧光染色证实冠脉血栓中存在NETs;ELISA检测结果显示STEMI患者血清中NETs的含量显著高于志愿者。应用人中性粒细胞分离试剂盒分离人外周血中性粒细胞,行迪夫快速染色后行镜检,可见大量的含有分叶核的细胞,提示中性粒细胞分离成功。应用20%STEMI患者血清培养基培养中性粒细胞3h后,收集上清及中性粒细胞,上清行ELISA检测显示STEMI血清刺激后NETs含量明显升高,中性粒细胞行免疫荧光染色及流式细胞仪检测,结果显示STEMI血清可刺激中性粒细胞产生NETs;在STEMI患者血清培养基中加入anti-IL-8单克隆抗体继续培养中性粒细胞3h后,收集中性粒细胞,行流式细胞仪检测,结果显示anti-IL-8抗体可抑制NETs的生成;在正常血清培养基中加入IL-8继续培养中性粒细胞3h后,收集中性粒细胞,行流式细胞仪检测,结果显示IL-8可促进NETs的生成。结论:冠脉血栓中含有中性粒细胞及NETs;与健康志愿者相比,STEMI患者血清中NETs含量显著升高;STEMI患者血清中IL-8为刺激中性粒细胞产生NETs的一个主要因素,抑制IL-8可显著减少了 NETs的形成。
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