鲨鱼软骨提取物联合螺旋藻硒多糖治疗恶性肿瘤的实验研究

被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong461
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:观察超声波用于螺旋藻硒多糖(Polysaccharide from Se-enrichedSpimlina Platensis,Se-PSP)提取的可行性,并对实验条件进行优化:分离纯化Se-PSP并测定其糖与蛋白的含量,研究其体外对肿瘤细胞生长的影响。方法:通过正交实验设计优化超声波法提取螺旋藻硒多糖的实验条件;三氯乙酸法去除蛋白,DEAE-纤维素层析柱及8 kDa~10 kDa的透析袋对Se-PSP粗品进行分离纯化,应用硫酸-恩酮比色法、考马斯亮蓝G-250比色法,测定糖及蛋白的含量;用MTT比色法研究浓度为10μg/ml时Se-PSP总糖及其不同组分体外对SKOV-3细胞生长的影响,并研究不同浓度的Se-PSP2体外对SKOV-3细胞、HepG-2细胞、BGC-803细胞、CNE细胞和Tca-8113细胞生长的影响。结果:富硒螺旋藻干粉在pH 11和60℃的水浴条件下超声波处理60 min提取率最高,糖含量最多;经DEAE-纤维素柱层析分离得到4个不同分子量的多糖组分Se-PSP1、Se-PSP2、Se-PSP3和Se-PSP4;其中Se-PSP2组分是Se-PSP总糖的主要成分(含量占70.2%),透析纯化后糖含量为98.49%,蛋白含量为0.45%;MTT实验结果提示浓度在10μg/ml时,Se-PSP总糖及Se-PSP1、Se-PSP2、Se-PSP3和Se-PSP4对SKOV-3细胞生长的抑制率分别为(33.393±5.437)%、(22.290±8.399)%、(44.881±4.878)%、(45.354±4.931)%和(46.203±4.455)%;MTT比色法证实Se-PSP2能有效抑制SKOV-3、HepG-2、BGC-803和Tca-8113细胞的增殖,抗瘤谱较广,抑制作用有剂量依赖趋势。对不同的肿瘤细胞生长的抑制率有所不同,其中对SKOV-3卵巢癌细胞抑制作用最强,抑制率最高达到(45.202±4.401)%,对CNE鼻咽癌细胞抑制作用较弱,抑制率最高为(22.238±2.481)%。结论:螺旋藻硒多糖最佳提取方案是pH11和60℃的水浴条件下超声波处理60 min,分离纯化后的Se-PSP总糖及各组分对SKOV-3细胞体外生长均有抑制作用,Se-PSP2组分是Se-PSP总糖的主要成分,Se-PSP2能有效抑制多种肿瘤细胞的生长,抗瘤谱较广,并对不同的肿瘤细胞作用有所不同,有望成为治疗恶性肿瘤的良药。目的:研究一种从鲨鱼软骨(Shark Cartilage,SC)中提取低分子蛋白简便、快速的方法,并证实该方法提取的SC低分子蛋白能有效地抑制新生血管的形成。方法:以鲨鱼软骨为原料,粉碎后反复冻融,离心去沉淀,超滤、真空干燥后得到鲨鱼软骨低分子蛋白;光学显微镜及电镜下观察SC低分子蛋白作用72 h后,EVC304细胞的形态变化;体外实验观察它对内皮细胞增殖、黏附和迁移的影响,用鸡胚绒毛尿囊膜实验测定其对新生血管形成的影响。结果:SC低分子蛋白作用后,光镜观察EVC304细胞生长不良,细胞表面伪足消失,形态变圆、变小,皱缩,聚集成团,胞浆内颗粒增多,透亮度降低;电镜观察细胞核形态明显不规则,有丝分裂相明显减少;SC低分子蛋白在浓度超过50μg/ml时能有效抑制血管内皮细胞的增殖,在浓度超过5μg/ml时能有效抑制内皮细胞的黏附,并且此抑制作用均呈剂量依赖趋势;浓度在100μg/ml时EVC304细胞生长抑制率为(36.770±2.800)%、黏附抑制率为(52.954±4.442)%和迁移运动抑制率为(68.01±5.65)%;SC低分子蛋白作用48 h后,阴性对照组鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管数目为(18.750±3.671)根,低分子蛋白实验组为(7.167±1.529)根,差异有统计学意义(P<0.05),SC低分子蛋白能有效抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管的形成。结论:我们采用将SC冻融超滤法获取的鲨鱼软骨低分子蛋白,可以抑制内皮细胞生长、黏附和迁移运动,进而抑制新生血管的形成,有望成为抑制肿瘤血管生长的新型靶向药物。目的:筛选鲨鱼软骨(Shark Cartilage,SC)低分子蛋白联合螺旋藻硒多糖(Polysaccharide from Se-enriched Spirulina Platensis,Se-PSP)的最佳配伍浓度,观察二者联合应用对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响。方法:SC低分子蛋白和Se-PSP分别按20∶1、10∶1、5∶1、2.5∶1、1:1、1∶2.5、1∶5、1∶10和1∶20质量比混合,测定其体外对SKOV-3细胞生长和黏附运动的抑制作用,对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成的抑制作用;选Balb/c小鼠50只,随机分为5组,连续给药10 d后,用刀豆蛋白A(ConA)诱导和改良MTT法观察各实验组小鼠脾淋巴细胞增殖情况;选C57BL/6小鼠60只,随机分为6组,建立荷Lewis肺癌肿瘤小鼠模型,连续给药10 d后,计算各组瘤体抑制率。结果:SC低分子蛋白联合Se-PSP对SKOV-3细胞生长和黏附运动均有抑制作用,浓度比5∶1时作用最强,抑制率分别是(51.108±4.618)%、(53.303±5.194)%;鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成抑制实验发现,当配伍浓度比在20∶1、10∶1和5∶1时各实验组鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目分别为(6.02±0.748)、(5.200±0.980)和(5.600±0.800)根,三者两两比较没有统计学差异(P>0.05),但与其他配伍组相比差异有统计学意义(P<0.05):小鼠脾淋巴细胞增殖实验结果显示,5∶1配伍组小鼠脾淋巴细胞增殖指数(1.831±0.035)明显高于SC低分子蛋白组(1.533±0.046)和Se-PSP组(1.624±0.043),三者分别与生理盐水组(1.367±0.058)相比差异均有统计学意义(P<0.01),SC低分子蛋白和Se-PSP均有促进Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖作用,且联合应用疗效增强;肿瘤生长抑制实验结果显示,5∶1配伍组瘤体抑制率明显高于SC低分子蛋白组和Se-PSP组,5∶1混合物+环磷酰胺组明显高于环磷酰胺组,差异均有统计学意义(P<0.05),SC低分子蛋白和Se-PSP组分别与阴性对照组相比,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:鲨鱼软骨低分子蛋白和Se-PSP分别按5∶1质量比混合是理想的配伍,二者联合对实体瘤生长的抑制作用有联合增效作用,并能促进小鼠脾淋巴细胞增殖,提高小鼠免疫力,与化疗药物环磷酰胺联合有增强疗效的作用,有望成为治疗恶性肿瘤的的新药。
其他文献
中长期利率信息对货币政策制定具有重要指导意义,关系到货币政策的实施效果。本文利用仿射无套利宏观金融模型构建包含收益率曲线完整信息的基准、后顾、前瞻、前瞻后顾混合
28Cr高铬铸铁是目前使用的主要的抗磨材料之一,在抵抗腐蚀磨损和磨料磨损中表现出优越的性能。但是由于其含有一定量的钼,成本较高,限制了其推广使用。 本文以厚大断面工件为
由于点焊电极点焊镀层钢板的寿命比点焊非镀层钢板的寿命短,随着镀锌钢板在汽车构件中应用的日益增加,电极的耗量也增加,所以提高点焊电极寿命的研究具有重要的意义。本文研制了
自科学发展观在中国共产党第十六届三中全会上被正式提出、在中国共产党第十七次全国代表大会上被写入党章以来,当代中国的科学发展观作为一次伟大的社会实践,体现了发展主体
行政裁量权滥用的控制是行政法学的核心研究课题之一。我国行政裁量权滥用的最关键也是最基础的原因是,长期以来我国对行政裁量权滥用的司法审查相当薄弱,特别是司法审查原则
梁启超的女性权利思想有一个由女学到女权的建构过程,该过程与甲午战争到辛亥革命的时局变化相终始。他的反缠足、兴女学、禁早婚、倡女权,都是民族国家建构过程中的重要环节
当前,世界各国制造业普遍面临日益激烈的全球化市场竞争。为了赢得竞争优势,纷纷开展先进制造技术的研究。金属切削刀具是先进制造技术的关键和基础。刀具设计,尤其是在复杂
以布朗和莱文逊的礼貌理论为框架,对商务电子邮件与传统商务信函所使用的不同礼貌策略进行比较分析,发现两者对礼貌的重视程度总体上没有显著差异,但传统商务信函中的礼貌表
<正> 晋末宋初之际。在玄云妙雾弥漫令人窒息惶惑的诗坛上,拂过一阵夹带山风水气和田间野香的诗风,这就是山水田园派诗,提到田园诗人,首先让人想到的便是陶渊明。陶渊明的诗