立体丝素蛋白纳米纤维支架移植嗅鞘细胞在大鼠脊髓损伤模型中的应用研究

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目的:近年来,嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells,OEC)移植用于治疗脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)成为了脊髓损伤修复的研究热点。传统的髓内注射移植方式受限于OECs的迁移能力、局部炎症屏障等因素,疗效有待提高。本文运用立体丝素蛋白纳米纤维支架(Stereo silk nanofibers scaffolds,SSNS)作为OECs移植的载体,探索了支架对于OECs在体内及体外的影响,为SCI的治疗提供了更多的可能性。方法:将制备的SSNS制备为二维结构,在体外通过免疫荧光染色判断材料对OECs形态学的影响,通过CCK-8及Annexin V-PI双染法研究材料对OECs增殖及凋亡的影响,并在荧光显微镜下动态观察体外移植至SSNS上的嗅鞘细胞。免疫印迹法分析RhoA/ROCK1信号通路在OECs移植至支架后的激活情况。将移植细胞后的大鼠脊髓制为切片,荧光显微镜下观察移植细胞数量,并通过切片GFAP染色阴性区域大小判断脊髓损伤疤痕大小。移植OECs后应用BBB评分评价术后运动功能恢复情况。结果:体外实验证明二维支架会使OECs形态变为更加不规则,附着于支架排布;CCK-8实验结果示:细胞移植后第3天时实验组与对照组的吸光度并无明显差异,而第5、7天时,实验组的吸光度明显高于对照组(P<0.05);Annexin V-PI双染法实验结果示:细胞移植5天时实验组的凋亡死细胞率为3.57%,对照组的凋亡死细胞率则为5.75%,两者之间具有显著的统计学差异(P<0.05);移植至支架后OECs RhoA/ROCK1信号通路激活增加,其下游蛋白cyclin D1及cyclin A2蛋白表达增加,p27蛋白表达降低。体内实验结果示:SSNS组脊髓切片免疫荧光染色GFAP(-)区域面积明显小于IT组及PBS组,且移植的OECs数量明显多于IT组(P<0.05)。SSNS组术后BBB评分在各时间点均高于IT组(P<0.05)。结论:通过体外实验及动物体内实验,证实了支架对于OECs具有支持嗅鞘细胞增长、促进增殖且抑制凋亡的作用,并在体内实验中得到证实。体内实验验证了运用SSNS移植OECs治疗脊髓损伤的可行性及相较于对照组移植效率及疗效的优越性,为SCI的修复提供了新的思路及方法。
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