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乳酸菌作为益生菌,可以通过对抗炎因子和促炎因子的调节发挥抗肠炎作用,研究表明,不同乳酸菌对不同细胞因子的调节作用存在种属性差异。近几年,乳酸杆菌对致病菌S.sonnei刺激HT-29细胞产生细胞因子的调节作用及其作用机制的研究较少,所以本实验以S.sonnei作为炎症刺激,研究乳酸杆菌与HT-29细胞中TLR-NF-κB信号途径的相关性。采用ELISA法研究副干酪乳杆菌副干酪亚种M5、干酪乳杆菌Q8和鼠李糖乳杆菌J10对HT-29产生的多种细胞因子白介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和IL-12等的调节作用。采用免疫荧光技术和流式细胞术研究了三种乳酸杆菌M5-L、Q8-L和J10-L对HT-29细胞中TLR-NF-κB信号通路的调节作用。实验结果显示,只加S.sonnei的阳性对照组中,IL-1β分泌量为156.3pg/m L,而M5-L、Q8-L和J10-L的预防组中,IL-1β的分泌量分别为118.9pg/m L、80.0 pg/m L和104.9 pg/m L,说明三种乳酸杆菌对炎性因子IL-1β均有显著的抑制。IL-8的分泌量在只加S.sonnei的阳性对照组中,为1096.0pg/m L,而M5-L、Q8-L和J10-L的预防组中,IL-8的分泌量分别为112.7 pg/m L、290.9 pg/m L和213.0 pg/m L,说明三种乳酸杆菌对炎性因子IL-8的分泌均也有显著的抑制。对TNF-α的检测结果显示,三种乳酸杆菌可以促进HT-29细胞中TNF-α的分泌,但分泌量较少。对IL-10的检测结果显示,M5-L和J10-L能显著促进抗炎因子IL-10的分泌。对炎性因子IL-6和IL-12的检测发现,HT-29细胞本身不能产生IL-6和IL-12,且S.sonnei也不能刺激HT-29细胞产生这两种炎性因子。用荧光定量PCR法,对IL-8的m RNA进行检测,结果显示M5-L、Q8-L和J10-L均能显著降低IL-8的m RNA表达,表明三种乳酸杆菌不仅能抑制炎性因子IL-8的分泌,而且也能抑制其m RNA表达。免疫荧光技术检测结果发现,致病菌S.sonnei能促进NF-κB发生核转位,从而促进炎性因子IL-8的产生,三种乳酸杆菌对NF-κB的核转位有一定的抑制作用,但不能完全抑制。流式细胞术检测结果表明,致病菌S.sonnei能刺激诱导HT-29细胞上TLR4表达的提高,三种乳酸杆菌均能抑制S.sonnei刺激导致的HT-29细胞上TLR4表达的提高,从而抑制TLR4介导的信号通路。