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背景肺癌是目前全球发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一,作为威胁全世界人类健康的重大疾病,其死亡人数约占整个癌症死亡人数的17.6%,五年生存率仅为8.9%-15%。且呈逐渐上升趋势。根据WHO估计二十一世纪我国将成为肺癌发病率较高的国家之一。肺腺癌作为肺癌发病的常见类型,化疗为治疗的重要手段,但是目前对有化疗指针的病人化疗有效率极低,化疗失败的主要原因是肺腺癌细胞在化疗过程中逐渐产生了耐药性。以往肺癌的耐药性研究大多集中在单个或少数几个相关基因及其蛋白质产物上,难以反映肺癌DNA改变的全貌,因此有必要寻求进一步的研究。目的本实验从蛋白质整体入手,利用差异蛋白质组学研究方法,找到肺腺癌耐药细胞A549/DDP特异表达耐药蛋白质点,全面、真实地揭示肺腺癌耐药的过程和本质,为肺腺癌耐药机制及其逆转的研究开辟新的思路、提供新的线索,为临床选药、评估病人疗效以及寻找新的药物治疗靶标提供理论据。方法本研究培养并收集了肺腺癌耐药细胞株A549/DDP和非耐药细胞株A549细胞样品,用双向凝胶电泳技术分离两细胞样品中的总蛋白质,凝胶经改良考马斯亮蓝染色,用PDQUuest 7.1版本软件分析、比较二维聚丙烯酰氨凝胶电泳(two-dimensionalpolyacryl-amide gelelectrophoresis,2-DPAGE)图谱,识别差异表达蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDl-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹图(peptide mass fingerprintPMF),然后利用生物信息学方法搜索数据库鉴定确定部分差异蛋白质。结果提取样品蛋白行二维凝胶电泳,采用考马斯亮蓝染色后两组胶每张大约可以检测到1000个左右蛋白点,经PDQuest软件分析找到相差2倍以上的差异点约100个,其中选取差异明显的40个差异蛋白点进行MOLDI-TOF-MS质谱鉴定。质谱鉴定获得35张肽质指纹图,经数据库搜索后22个蛋白点被初步鉴定,其中2个蛋白点重复,13个蛋白点无结果。用Mascot软件查询SwiSS-PROT数据库初步鉴定蛋白质点20个,即热休克蛋白27(Heat shock protein beta27)、膜联蛋白A2(AnnexinA2)、组蛋白(Histone H4)、磷酸丙糖异构酶(Triosephos-phateisomerase)、脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding proteins,FABP)、Peroxinredoxin-4、延伸因子(Elongation factor-1)等。结论1.用固相pH梯度双向凝胶电泳获得了重复性较好的肺腺癌耐药细胞株A549/DDP和非耐药细胞株A549的双向电泳凝胶图谱。2.肺腺癌耐药细胞株A549/DDP和非耐药细胞株A549蛋白质组表达存在明显差异,采用差异表达蛋白质组学方法,成功鉴定了20种差异表达的蛋白质点,为进一步建立人肺腺癌的2-DE数据库奠定了基础。3.热休克蛋白27(Heat shock protein beta27)、膜联蛋白A2(Annexin A2)、组蛋白(Histone H4)、磷酸丙糖异构酶(Triosephos-phate isomerase)、脂肪酸结合蛋白(fatty acidbinding proteins,FABP)、Peroxinredoxin-4、延伸因子(Elongationfactor-1)等蛋白与肺腺癌耐药密切相关,可进一步行蛋白质功能的研究。