苹果砧木耐盐突变体的筛选及其RAPD分析

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:lsh123456lsh
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苹果是重要的果树树种之一,主要靠嫁接繁殖,其耐盐性主要取决于砧木。因此,选择利用具有较高耐盐能力的砧木是提高苹果耐盐力的关键。利用组织培养与诱变技术相结合选育抗性突变体,可极大提高耐盐砧木育种效率,获得优良的新种质。但是经诱变和耐盐性反复筛选而获得的突变体,不排除部分个体是由环境胁迫而产生的适应性改变,而并非稳定的遗传变异。因此,突变体的鉴定是诱变育种的关键环节之一。 本试验以苹果砧木M7、78-48及其耐盐诱变株系为材料,对苹果砧木耐盐诱变体进行了筛选和RAPD分子标记分析,主要研究结果如下: 1.采用高浓度NaCl 0.8%和1.0%作为选择压,对2个砧木的耐盐诱变株系进行多代交替盐筛选,获得耐盐性稳定的突变株系。 2.在盐培养下对M7及其5个耐盐突变株系Z1-Z5和78-48及其2个耐盐突变株系L1、L2的形态指标进行观察和测定,结果表明:各突变株系的存活率高于对照,受害率和受害指数低于对照,表现较高的耐盐性。 3.建立了苹果砧木稳定、高效的RAPD反应体系,即20μL体系中,模板DNA的用量约40ng,Taq DNA聚合酶用量为1.25U,引物浓度0.25μM,dNTPs浓度为0.2mM,Mg2+浓度为3.0mM,1×Buffer。45个扩增循环为宜。 4.本试验对M7、78-48及其耐盐突变株系进行了RAPD分析。用153个引物检测到M7的突变株系Z2的2个多态性位点、Z3的4个多态性位点和Z5的1个多态性位点,而78-48的突变株系L1、12多态性位点数分别为42和32个。对2个砧木及其各突变株系的多态性和遗传背景进行统计分析,结果表明,各突变株系与对照的遗传背景高度一致,但在DNA分子水平上确认发生了变异。从而证明了突变的真实性。但所检测出的多态性位点那些与耐盐性突变有关,还需作进一步研究。 5.分析了苹果砧木耐盐突变体耐盐性鉴定的形态和生理生化指标,认为:受害指数能够综合表现苹果砧木受盐害的程度,较准确地反映出盐胁迫对砧木的生长抑制作用,可作为描述苹果砧木耐盐性的形态学指标;细胞膜透性、MDA和Cl-含量、SOD和POD酶活性等生理生化指标在苹果耐盐突变筛选初期,可作为耐盐性鉴定的参考指标。利用分子标记技术,从DNA分子水平上探查突变体,是鉴定环境适应性改变和遗传突变的最准确的手段。
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