半乳糖修饰胰蛋白酶的研究

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胰蛋白酶(Trypsin, EC 3.4.21.4)是动物消化道中一种主要的碱性蛋白水解酶,在医药、轻工业及科学研究方面具有广泛的应用价值,同时也常作为蛋白质工程模型。本研究利用末端胺化的半乳糖衍生物,在碳化二亚胺的催化下,对胰蛋白酶进行糖苷化修饰,并利用蓖麻凝集素亲和层析分离纯化半乳糖苷化的胰蛋白酶。研究结果表明,由于蓖麻凝集素是一种专一性的半乳糖结合蛋白,该亲和层析柱对半乳糖苷化的胰蛋白酶表现出良好的亲和性并能有效地将其从反应混合液中分离纯化出来。经吸收光谱和荧光光谱分析证实,半乳糖修饰后的胰蛋白酶结构发生了变化。吸收光谱在280nm的吸收峰明显降低并且范围变宽;荧光光谱在340nm的色氨酸残基特征发射峰有明显降低及蓝移。酶活性检测结果证明,修饰后的胰蛋白酶的热稳定性增加,在温度40℃以上时,修饰后的胰蛋白酶表现出较修饰前更高的热稳定性。此外,通过T50(即活性达到原活性50%时的温度)比较,半乳糖修饰后的胰蛋白酶的耐受温度从原来的49.3℃提高到了61.2℃。本研究为拓宽胰蛋白酶的应用奠定了基础。
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