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目的肺脏是维持气体交换的重要生命器官,其局部组织免疫细胞,特别是固有免疫细胞可敏感应对外部环境带来的各种挑战(如温度变化、尘埃污染和病原微生物等),以保障肺脏局部免疫系统稳定;一旦免疫细胞应对失控,则会导致免疫紊乱,引发多种疾病。低温环境极易引发多种呼吸系统疾病的发生,与低温环境下肺脏免疫紊乱密切相关。固有淋巴样细胞(innate lymphoid cells,ILCs)是新近发现的类天然免疫细胞,广泛分布于肺脏粘膜屏障。ILCs对肺脏微环境的平衡与稳定、抵御外界环境变化有着重要意义。目前,关于ILCs对外界低温环境的敏感性及其变化模式,以及由此对肺脏乃至整体免疫功能产生怎样影响尚无报道。玉屏风散(YPF)为中医扶正固表之明方,常用于防治呼吸道疾病,但YPF靶向ILCs的药理机制尚不明了。因此,本研究目的是:采用低温小鼠模型,观察低温环境中肺脏ILC1、ILC2、ILC3等亚群的变化,同时探讨YPF靶向ILCs的免疫保护作用。方法1.中药YPF的制备:根据YPF经典配方组成配伍方药,采用传统水提醇沉法制备YPF制剂;2.低温小鼠模型的建立及YPF的干预方法:将小鼠置于低温装置(10±1℃)中建立低温小鼠模型;模型小鼠通过饮用YPF制剂进行药物干预;3.观察各组小鼠外周血血细胞成分的变化;4.采用流式细胞胞内外染色技术分别检测小鼠脾脏、肺脏T淋巴细胞和ILCs各亚群的比例和绝对数的变化;5.采用RT-PCR法检测肺脏ILCs各亚群功能因子(IFN-γ、IL-5、IL-13、IL-17A)的转录水平的变化;6.HE染色法观察YPF干预前后模型小鼠肺组织形态学改变;7.采用RT-PCR检测肺组织中IL-12、CXCL-10、CCL-20、IL-25等细胞因子和趋化因子m RNA的表达水平。结果1.低温环境下小鼠外周血及脾脏淋巴细胞的变化模式低温环境下,小鼠外周血白细胞数显著下降(P<0.01),淋巴细胞数亦随之下降(P<0.01),嗜酸性粒细胞、单核细胞计数也显著降低(P<0.01);同时,小鼠脾脏ILCs细胞比例和细胞绝对数显著下降(P<0.05)。低温环境下,整体免疫系统处于免疫抑制状态,其中,ILCs细胞最为敏感。2.低温环境下小鼠肺脏ILCs各亚群的变化模式低温环境下,小鼠肺脏ILCs绝对数显著降低(P<0.01),其中,ILC1的比例及绝对数均显著降低(P<0.05),ILC2和ILC3的比例显著升高(P<0.05);ILC1的特征因子IFN-γm RNA表达显著下降(P<0.05),ILC2的特征性因子IL-5、IL-13 m RNA水平显著上升(P<0.01)。低温下肺脏呈现ILC1弱势、ILC2优势的免疫微环境。肺脏组织中参与ILC亚群分化和募集的细胞因子和趋化因子IL-12、CXCL-10、CCL-20、IL-25、IL-33和CXCL-2的表达均显著上调(P<0.05)。3.中药YPF对低温小鼠肺脏免疫功能的调节作用与低温模型组比较,YPF用药实验组,肺脏T淋巴细胞和ILCs细胞绝对数目均出现显著增多(P<0.05)。其中ILC1比例显著升高(P<0.01),ILC2比例显著降低(P<0.05);ILC1和ILC3的细胞绝对数显著升高(P<0.05);ILC1功能因子IFN-γ表达显著升高(P<0.05),ILC2功能因子IL-5、IL-13的表达显著减少(P<0.01)。ILC亚群功能分化相关因子IL-12、CCL-20和IL-25的表达显著下调(P<0.05)。结论1.低温环境下小鼠整体免疫功能处于抑制状态,其中,ILCs最为敏感。2.低温环境可诱导小鼠肺脏ILCs的免疫失衡,ILC1处于劣势,可导致肺脏抗感染、抗病毒能力下降;而ILC2处于优势,是肺脏嗜酸性粒细胞大量浸润的主因,并可增加肺脏罹患过敏性疾病的风险。3.中药YPF对低温小鼠肺脏免疫功能具有保护作用,可上调肺脏中ILCs细胞数目,改善ILC1的劣势状态,下调ILC2的优势状态,恢复ILCs亚群平衡,并进一步影响肺脏T淋巴细胞的免疫平衡,减少低温下肺脏感染性、过敏性疾病发生的风险。