小麦秸秆中蛋白质的生物学特性及其对纤维素酶活力影响的研究

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农作物秸秆作为第二代生物质燃料乙醇的原料,纤维素酶解率低一直是制约其商业运营的关键因素。为此本课题依照工业生产实际情况,对长期自然条件下储存的小麦秸秆蛋白进行研究,探讨蛋白对纤维素酶活力的影响,得出如下结果:1)经过长期在室温条件下的储存,小麦秸秆中蛋白含量仅剩约3.24%,很大一部分在储存过程中发生降解。分别采用SDS浸提缓冲液、NaOH浸提缓冲液、NaCl浸提缓冲液对这些蛋白进行了浸提,从提取率来看SDS浸提缓冲液能得到最大蛋白提取率。2)对SDS蛋白浸提液提取小麦秸秆的条件进行优化,通过单因素和正交试验研究,结果表明最佳提取条件为浸提时间12h,浸提温度50℃,固液比1:20,最大浸提率为21.76±0.01%,通过对浸提蛋白分子量的测定发现,浸提蛋白分子量分别约为18KD,22KD,32KD和40KD。3)研究去除蛋白后小麦秸秆纤维素酶水解的效果,蛋白去除方式为(a)蛋白浸提;(b)蛋白水解;(c)未处理。对蛋白酶水解秸秆蛋白条件进行研究发现,最佳条件为:蛋白酶用量100mg,固液比1:20,水解温度45℃,水解pH3.0,水解时间12h。对比三种方式处理后蛋白残余量,蛋白去除效果为:蛋白水解>蛋白浸提>未处理;对三种方式处理过的小麦秸秆粉末进行纤维素酶解条件优化,通过单因素试验和正交试验得到各自最大纤维素酶解率为:蛋白水解样品酶解率56.23%,蛋白提取样品酶解率49.17%,未处理样品酶解率35.01%,说明蛋白去除效果与纤维素酶解率正相关,该蛋白质对纤维素酶解过程存在抑制作用。4)提取出的蛋白自身不具备内源性纤维素酶活力,但是当它与纤维素酶共同作用时对纤维素酶存在一定抑制作用,当反应体系中蛋白浓度为1.2mg/mL时,总酶活和内切葡聚糖酶活最大抑制率分别可达9.78%和52.42%,而对β-葡萄糖苷酶具有促进作用,当溶液体系中蛋白浓度为1.2mg/mL时,β-葡萄糖苷酶活力达到最大增幅71.44%。5)考察蛋白添加顺序对纤维素酶解的影响,可以明确知道何种成分和纤维素结合而影响了纤维素酶作用,结果为当蛋白先与纤维素酶充分结合对酶解的抑制作用更为明显,说明该蛋白可能占有了纤维素酶的活性中心位点,从而降低了纤维素酶活力。
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