【摘 要】
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第一部分 冠状动脉粥样硬化症患者外周血ZNF295-AS1、miR-508-5p的表达分析目的:探究ZNF295-AS1、miR-508-5p在冠状动脉粥样硬化症患者及无冠状动脉粥样硬化症者中的表达是否具有差异性。方法:选取了2018年4月至2018年9月在我科住院行冠脉造影检查确诊为冠状动脉粥样硬化症患者70例及70例经检查后无冠状动脉粥样硬化症的患者作为阴性对照,抽取5ml静脉血,检测并分析Z
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第一部分 冠状动脉粥样硬化症患者外周血ZNF295-AS1、miR-508-5p的表达分析目的:探究ZNF295-AS1、miR-508-5p在冠状动脉粥样硬化症患者及无冠状动脉粥样硬化症者中的表达是否具有差异性。方法:选取了2018年4月至2018年9月在我科住院行冠脉造影检查确诊为冠状动脉粥样硬化症患者70例及70例经检查后无冠状动脉粥样硬化症的患者作为阴性对照,抽取5ml静脉血,检测并分析ZNF295-AS1、miR-508-5p的表达。结果:1.在冠状动脉粥样硬化症患者中lncRNAZNF295-AS1表达上调,差异具有统计学意义,P<0.001;2.在冠状动脉粥样硬化症患者中miR-508-5p表达下调,差异具有统计学意义,P<0.0001;3.Pearson相关系数分析发现在冠状动脉粥样硬化症患者血清中miR-508-5p和lncRNAZNF295-AS 1表达呈负相关,差异具有统计学意义,P<0.0001。4.吸烟、糖尿病、高血压、及ZNF295-AS1的高表达是冠状动脉粥样硬化症患者的危险因素。结论:冠状动脉粥样硬化症患者血清中,lncRNAZNF295-AS1表达上调,miR-508-5p下调,且两者呈负相关。第二部分 基于miR-508-5p/ATG7轴探讨ZNF295AS1促进OX-LDL诱导HUVEC自噬目的:通过建立内皮损伤细胞模型（ox-LDL处理的HUVEC）分析ZNF295AS1对ox-LDL处理的HUVEC中自噬的作用。方法:1.使用人脐静脉内皮细胞株（Human umbilical vein vascular endothelial cells,HUVECs）,使用不同剂量ox-LDL处理HUVEC24h建立内皮损伤模型,显微镜下观察细胞形态、检测细胞中ZNF295-AS1的表达、MTT检测细胞增殖能力、WB检测自噬相关蛋白的表达,以确定ox-LDL对HUVEC自噬的影响;2.构建ZNF295-AS1 siRNA,使ZNF295-AS1 沉默,转染HUVEC 细胞后,使用ox-LDL处理细胞,检测细胞增值、自噬相关蛋白的表达,以确定ZNF295-AS1对ox-LDL处理下细胞自噬的调节作用;3.检测 ox-LDL处理后 HUVEC 中 miR-508-5p,以确定miR-508-5p 在ox-LDL处理的HUVEC中的表达差异;4.通过对RegRNA2.0在线软件分析发现ZNF295-AS1有1个潜在的miR-508-5p结合位点,通过双荧光素酶实验验证miR-508-5p与ZNE295-AS1存在靶向结合,并且在转染ZNF295-AS1 siRNA的HUVEC内检测miR-508-5p的表达,及检测HUVEC内转染miR-508-5pmimic后ox-LDL处理HUVEC中自噬相关蛋白的表达,显微镜下观察细胞形态,以确定miR-508-5p与ZNF295-AS1相互作用;5.通过对RegRNA 2.0在线软件分析发现miR-508-5p有1个潜在的ATG7结合位点,双荧光素酶实验验证结合,在miR-508-5pmimic细胞内过表达ATG7,检测ox-LDL诱导的HUVEC自噬,以确定miR-508-5p与ATG7的相互作用。结果:1.lncRNAZNF295-AS1在ox-LDL处理的HUVEC中上调,差异具有统计学意义,P<0.0001;2.ZNF295-AS1 沉默后 HUVEC 细胞中lncRNAZNF295-AS1表达显著下调,差异具有统计学意义,P<0.01;3.转染后的ox-LDL处理HUVEC细胞中miR-508-5p上调。差异具有统计学意义,P<0.01;4.miR-508-5p在经转染miR-508-5p mimic后HUVEC内表达上调,差异具有统计学意义,P<0.001;在mimic NC组中ATG7表达量基本不变,在miR-508-5p mimic组中ATG7表达量下降,差异具有统计学意义,P<0.01。5.干扰ZNF295-AS1使miR-508-5p表达上调,导致ATG7表达下调,减轻了 ox-LDL诱导的HUVEC自噬。结论:ZNF295-AS1对ox-LDL处理的HUVEC中自噬有促进作用,是通过miR-508-5p/ATG7轴参与ox-LDL处理的HUVEC中的自噬调节。
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