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目的:白血病是一种侵犯全身的非实体性血液系统的恶性肿瘤。白血病治疗不同于实体瘤,不能手术治疗,化疗显得尤为重要,化疗是治疗白血病的一种经典的、传统的、首选的重要方法。但是这种方法存在两大障碍:一是肿瘤细胞对化疗药物产生的药物耐受导致化疗失败,二是化疗药物对骨髓造血细胞产生毒性使化疗方案不能顺利实施。研究证明这两大障碍均与多药耐药(MDR1)基因及其表达产物P-gp有关,它在肿瘤细胞的高表达直接导致对化疗药物的耐药而致化疗的失败,而在骨髓干细胞的低表达使造血细胞受损引起骨髓抑制而化疗剂量、疗程受限导致化疗的失败。为了克服化疗中骨髓抑制,将含人MDR1全长cDNA逆转录病毒载体转染人脐血单个核细胞,探索将MDR1基因体外导入脐血造血细胞的一种稳定、安全、有效的方法,评价MDR1基因转染脐血细胞极其功能表达,进而为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。方法:应用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法,通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞,应用PCR方法、免疫组化法、流式细胞学柔红霉素排出实验、细胞周期比例等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等<WP=9>不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞表达,转染率及其与转染时间的关系和功能表达;转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。结果:(1)探讨了安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞体系和方法;(2)多聚酶联反应方法证实外源性MDR1基因可有效地在体外整合到脐血单个核细胞中;(3)免疫组化法显示2日、4日、6日转染率分别为18%、29.83%、34.67%;(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能。(5)转染后的脐血细胞周期生物学特性无异常。结论:MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的,且在体外有稳定、有效的表达。为进一步在化疗中骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。