【摘 要】
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该文以该实验室分离并鉴定的牛泡沫病毒中国毒株(BFV3026)为材料,经PCR构建Borf-1全长及系列缺失原核表达质粒,并利用大肠杆菌pET系统表达并纯化Borf-1及其系列缺失蛋白.通过
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该文以该实验室分离并鉴定的牛泡沫病毒中国毒株(BFV3026)为材料,经PCR构建Borf-1全长及系列缺失原核表达质粒,并利用大肠杆菌pET系统表达并纯化Borf-1及其系列缺失蛋白.通过凝胶阻滞试验和蛋白质转染瞬时表达,探讨Borf-1对两类启动子的结合、激活功能.同时,为探索BFV LTR、IP及Borf-1在原核细胞中的功能,该文构建含BFV IP、LTR及其系列缺失与荧光素酶基因luc的重组质粒,转化大肠杆菌E.coliJM109,结果表明IP不能在原核细胞中行使启动子功能,而BFV LTR可在原核细胞中有效启动luc基因的表达,且启动区域位于-90至-125位之间.序列分析证实该区域内存在与原核启动子保守区同源性很强的序列.质粒共转化试验表明:BFV的主要调节蛋白Borf-1在E.coli中间样可以激活其自身的LTR,蛋白N端36aa与激活作用无关,其在LTR上的应答区仍位于-310/-140之间,推测BFV的Borf-1对其LTR的激活机制普遍存在于从真核到原核的各种细胞中.这一工作为研究Borf-1蛋白的作用机制提供了一条新的途径.
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