论文部分内容阅读
一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一种气体信号分子，在植物体内具有应答生物或非生物胁迫的作用，NO的网络调控是多靶点、多机制同时发挥作用。前期研究发现，外源施加NO能较好的控制桃果实采后褐腐病的病斑扩展。亚硝基谷胱甘肽(GSNO)是生物体内NO的主要贮存形式，NO及其相关的氮氧化物衍生物可以修饰各种生物大分子，这些修饰为NO特异调控细胞信号转导提供了丰富的方式，蛋白质亚硝基化是其中重要的可逆修饰之一。我们利用iodoTMT技术，对不同时间段内发生亚硝基化修饰的蛋白质进行鉴定，深入揭示NO诱导桃果实提高抗病性的分子机制。主要结果如下:
用15μM的NO溶液和水浸泡桃果实，发现处理组亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)的活性升高、谷胱甘肽还原酶(GR)活性降低，内源NO、GSNO、还原型谷胱甘肽(GSH)含量增加，内源氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量减少，说明外源NO处理可以通过提高内源NO和GSH的含量提高抗病性。
用表面等离子体共振技术对接菌后0h、4h、6h和12h的桃果实进行亚硝基化水平测定，结果显示，NO处理的桃果实亚硝基化程度明显高于对照组，其中接种后4h亚硝基化程度最高，为蛋白质组学分析提供参考依据。
应用iodoTMT标签技术对亚硝基化修饰蛋白进行鉴定，共鉴定出1108种发生亚硝基化修饰的蛋白质，其中被定量的蛋白质有799种。通过GO和KEGG Pathway注释分析，发现鉴定到的蛋白质共涉及12种分子功能，10种细胞组成和15种生物进程;NO处理4h的桃果实中鉴定出149神蛋白质表达上调，即发生亚硝基化修饰，141种蛋白质表达下调，即发生去亚硝基化修饰;6h的桃果实中，有125种蛋白质表达上调，103种蛋白质下调。
对4h的差异蛋白进行GO/Protein domain/KEGG Pathway富集分析，发现在差异蛋白中，上调蛋白显著富集在“叶绿体”、“质体”等细胞组成中，显著富集在“酪氨酸代谢”等代谢途径;下调蛋白显著富集在“金属离子跨膜转运蛋白活性”和“锌离子结合”等分子功能中，显著富集在“谷胱甘肽代谢”等代谢途径。
用15μM的NO溶液和水浸泡桃果实，发现处理组亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)的活性升高、谷胱甘肽还原酶(GR)活性降低，内源NO、GSNO、还原型谷胱甘肽(GSH)含量增加，内源氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量减少，说明外源NO处理可以通过提高内源NO和GSH的含量提高抗病性。
用表面等离子体共振技术对接菌后0h、4h、6h和12h的桃果实进行亚硝基化水平测定，结果显示，NO处理的桃果实亚硝基化程度明显高于对照组，其中接种后4h亚硝基化程度最高，为蛋白质组学分析提供参考依据。
应用iodoTMT标签技术对亚硝基化修饰蛋白进行鉴定，共鉴定出1108种发生亚硝基化修饰的蛋白质，其中被定量的蛋白质有799种。通过GO和KEGG Pathway注释分析，发现鉴定到的蛋白质共涉及12种分子功能，10种细胞组成和15种生物进程;NO处理4h的桃果实中鉴定出149神蛋白质表达上调，即发生亚硝基化修饰，141种蛋白质表达下调，即发生去亚硝基化修饰;6h的桃果实中，有125种蛋白质表达上调，103种蛋白质下调。
对4h的差异蛋白进行GO/Protein domain/KEGG Pathway富集分析，发现在差异蛋白中，上调蛋白显著富集在“叶绿体”、“质体”等细胞组成中，显著富集在“酪氨酸代谢”等代谢途径;下调蛋白显著富集在“金属离子跨膜转运蛋白活性”和“锌离子结合”等分子功能中，显著富集在“谷胱甘肽代谢”等代谢途径。