3株野鸟源H7亚型禽流感病毒分离鉴定、遗传进化及感染性分析

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:hmxj1977
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本研究在2010年1月份采自湖南小白额雁和青头潜鸭样品中分离到2株H7亚型禽流感病毒,分别命名为A/Lesser White-fronted Goose/HuNan/412/2010(H7N7)(L-412)和A/Baer’s Pochard/HuNan/414/2010(H7N 1)(29Y);同年秋季在采自吉林向海地区的红头潜鸭样品中分离到1株H7亚型禽流感病毒,命名为A/Common Pochard/XiangHai/ 420/2010(H7N1)(865).通过RT-PCR试验和基因测序,成功获得了3株分离株的全基因序列。在此基础上,进一步对3株分离株进行了遗传进化、感染性和受体结合特性分析,具体实验结果如下:1.3株野鸟源H7亚型AIV毒株的分离鉴定、遗传进化分析3株分离株的8个基因都位于欧亚分支内,分离株L-412有6个基因来源于韩国野鸟分离株,NS基因与部分北美毒株、2003年荷兰H7N7亚型人流感毒株基因核苷酸同源性很高,为98.2%和97.7%。L-412是由亚洲不同毒株的片段重组而成,并且NS基因存在欧亚、北美分支以及跨物种之间的交流。分离株29Y和865的8个基因彼此之间高度同源,均来自于欧亚毒株,2株分离株的PB1基因与2013年意大利和2003年荷兰人流感毒株、2008年韩国猪流感毒株基因核苷酸同源性在97%以上,NP基因则与某些人流感、猪流感、北美毒株属于同一分支,NS基因与某些北美毒株、2003年荷兰H7N7亚型人流感毒株基因核苷酸同源性很高,为98.2%和97.7%。通过多氨基酸序列比对分析发现,3株分离株的NS基因42位突变为S,推断此3株分离株对小鼠有较高的毒力。2.HA蛋白裂解位点附近氨基酸分析3株分离株的HA蛋白裂解位点附近氨基酸序列分别为PEIPKGR↓GLFGAI、PELPKGR↓GLFGAI和PELPKGR↓GLFGAI,符合低致病性禽流感病毒的序列特征。3.L-412对不同动物的感染性分析L-412以106EID50的剂量以滴鼻、点眼的方式感染SPF鸡、SPF鸭,观察21d。鸡、鸭感染后均以泄殖腔排毒为主,能在多个脏器内检测到;在第14d检测到抗体。说明该毒株在鸡、鸭体内皆可复制,但是只在鸡个体之间水平传播。4.29Y对不同动物的感染性分析29Y以106EID50的剂量感染SPF鸡、SPF鸭和鼠,观察21d。鸡、鸭感染后在咽喉、泄殖腔内均检测不到病毒,仅能在个别脏器内检测到病毒,在第14d检测到抗体;攻毒组的鼠在肺脏内均可检测到病毒。说明该毒株既能够轻度感染鸡、鸭和鼠,并且在鸭个体之间发生水平传播。5.865对不同动物的感染性分析865以上述方法感染SPF鸡、SPF鸭和鼠。鸡、鸭感染后均可以在咽喉、泄殖腔和多个脏器内检测到病毒。在第14d检测到抗体。攻毒组的鼠在鼻洗液和肺脏内均可检测到病毒。说明该毒株既能够感染鸡、鸭也能感染鼠,并且在鸡/鸭个体之间均可发生水平传播。6.3株H7亚型AIV毒株的受体结合特性的分析利用a-2,3-sialidase和VCNA处理鸡红细胞。根据血凝试验结果,我们发现3株分离株既能结合SAa-2,3Ga1受体,又能结合SAa-2,6Ga1受体。说明3株分离株既能够感染禽类,还能感染哺乳动物。
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