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目的:探讨以加味茵陈蒿汤为代表的基本治法—解毒利湿、养阴益气法对D-氨基半乳糖所致的急性肝损伤实验动物模型肝组织TLR4信号转导通路及Th1/Th2的影响与作用机制,为临床推广应用中医药防治急性肝损伤提供理论依据。方法:选择清洁级SD大鼠,雌性,72只,随机分为空白对照组、模型组、阳性组(复方甘草酸苷,商品名:美能)、中药加味茵陈蒿汤低剂量组、加味茵陈蒿汤中剂量组和加味茵陈蒿汤高剂量组。所有大鼠均适应性喂养在室温15-20℃,相对湿度60-80%的实验室7天。7天后给模型组、西药组、中药组予一次性腹腔注射D-Ga1N600mg/kg以造成急性肝损伤模型,造模后除模型组外余各组立即给予药物灌胃,每日两次,其中阳性(美能)组的日给药量为15.75mg/kg/天,加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组的日给药量分别为:14.7g/kg,29.4g/kg,58.8g/kg,空白对照组予以0.9%的生理盐水灌胃,灌药体积为10ml/kg/次,一日两次,共灌胃治疗2天。在此期间观察动物一般状况、摄食及饮水等。实验结束时,所有大鼠股动脉采血,取血浆测丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase, ALT)天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase, AST)、总胆红素(TBIL);双抗体夹心ABC-ELISA法测定肿瘤坏死因子-α (Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-2(Interleukin-2, IL-2)、白细胞介素-4(Interleukin-4, IL-4)、白细胞介素-10(Interleukin-10, IL-10)、γ干扰素(Interferon-γ, IFN-y)及巨噬细胞炎性蛋白2(Macrophage inflammatory protein2,MIP-2)含量;免疫组化法测髓样分化因子-88(myeloid ddifferentiation factor88,MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(tumor necrosis factor receptor-associated factor, TRAF6)、IκB蛋白-α(inhibitory of NF-κB, IkB-α)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase p38MAPK)、(Toll-like-receptor4、TLR4)等指标的含量,处死动物,取肝右叶作常规HE切片,光镜下观察其变化。实时荧光定量PCR技术检测肝组织TLR4mRNA (Toll-like-receptor4)的转录水平,蛋白印迹(Western blot)法检测肝组织TLR4的蛋白表达水平。结果:(1)造模后48h,模型组大鼠ALT、AST及TB含量明显升高,与正常组相比差异有统计学意义(p<0.05)。阳性(复方甘草酸苷)组,加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组ALT、AST、TB均有所降低,与模型组比较,差异有统计学意义(p<0.05)。(2)造模后48h,模型组血浆TNF-α、MIP-2、MyD88、TRAF6、IkB-α、p38MAPK含量明显增高,与空白对照组比较,差异有统计学意义(p<0.05)。阳性(美能)组、加味茵陈蒿汤低、中、高剂量治疗组血浆TNF-α、MyD88、TRAF6、IkB-α、 p38MAPK均明显降低,与模型组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。(3)造模后48h,模型组血浆IL-2、IL-4、IFN-y及IL-10含量均明显增高,与空白对照组比较,差异有统计学意义(p<0.05)。阳性(美能)组、加味茵陈蒿汤低、中、高剂量治疗组血浆IL-2、IL-4、IFN-y及IL-10含量明显降低,与模型组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。(4) TLR4mRNA检测结果:模型组TLR4mRNA的表达明显增高,与空白对照组比较,差异有统计学意义(p<0.05)。阳性(美能)组、加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组TLR4mRNA表达明显降低,与模型组相比,差异有统计学意义(p<0.05)(5) Western blot检测TLR4结果:模型组TLR4的蛋白表达明显增高,与空白对照组比较,差异有统计学意义(p<0.05)。阳性(美能)组、加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组TLR4蛋白表达明显降低,与模型组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。(6)肝组织HE染色检测结果显示:正常对照组大鼠肝细胞结构清楚,着色均匀,无肿胀、挤压、脆裂,无细胞变性、坏死及炎性细胞浸润。模型组大鼠肝脏结构破坏较明显,肝小叶结构欠清,肝细胞索排列紊乱,肝细胞变性、溶解坏死、肝汇管区炎性细胞浸润明显,肝细胞呈弥漫性空泡样变。加味茵陈蒿汤高剂量组肝小叶结构较模型组清楚,只有散在脂肪小滴浸润,肝细胞仅弥漫性轻度水肿。加味茵陈蒿汤中剂量组肝组织结构较模型组尚清楚,肝细胞变性、坏死较模型组有明显减轻。加味茵陈蒿汤低剂量组大鼠肝组织结构部分破坏,肝细胞变性、溶解坏死、炎性细胞润较模型组轻,呈中度弥漫性空泡样变。阳性组大鼠肝细胞结构部分破坏,肝细胞变性、坏死、出血较模型组略有减轻。结论1.加味茵陈蒿汤低、中、高剂量治疗组均能显著减轻D-氨基半乳糖所致大鼠的肝细胞损伤,降低血浆中ALT、AST、TB含量,具有较好的保肝降酶作用。同时在病理方面,均能显著改善肝组织的病理变化,缩小病变的面积,减轻肝细胞的损伤程度。2.加味茵陈蒿汤低、中、高剂量治疗组均能显著减轻D-氨基半乳糖所致大鼠的肝细胞损伤,通过调节Th1、Th2类细胞因子,纠正Th1/Th2的免疫失衡状态,调节机体的免疫反应而起到保肝作用。3.加味茵陈蒿汤高剂量和中剂量治疗组对D-氨基半乳糖所致急性肝损伤大鼠的TLR4信号转导通路均有一定的影响,可能通过调节细胞因子-细胞信号转导通路起到保肝的作用。