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过敏反应是植物最常见的抗病表现形式之一,是植物的一种基本的抗病防卫反应。过敏反应的特征是被侵染的寄主组织局部变褐,被感染部位及周围一部分细胞死亡,形成枯斑,从而阻止了病原物的进一步扩散。这种局部的过敏性反应通常可激发整个植株产生系统获得性抗性,从而使植物体获得一定时期内对多种病原物的广谱抗性。一些研究发现线粒体呼吸链在植物细胞过敏性死亡的诱发过程中具有重要作用,然而对于呼吸链在其中详细的作用机制迄今仍很不清楚。因此本论文对呼吸链在植物细胞死亡调控中的作用开展了一些研究,取得的主要结果如下: 1、NaN3能够诱导烟草叶片形成枯斑及其悬浮细胞死亡,因此我们对其诱导机理进行了研究。NaN3对烟草悬浮细胞的细胞色素呼吸途径活性有直接的抑制作用,这一抑制作用直接导致细胞内ATP水平显著降低。由于用氧化磷酸化的解偶联剂CCCP处理烟草细胞显著降低其胞内ATP水平即可诱导细胞死亡,因此导致细胞内ATP水平显著降低是NaN3诱导烟草细胞死亡的机制之一;经检测发现NaN3处理的烟草悬浮细胞的细胞质中细胞色素c含量明显升高,说明细胞色素c跨线粒体膜迁移到细胞质中诱导细胞死亡这一机制也可能参与了NaN3对烟草细胞死亡的诱导;用NaN3和过氧化氢酶同时处理可明显降低NaN3诱导的烟草细胞死亡率,表明活性氧(H2O2)也可能参与了NaN3诱导烟草细胞死亡的机制;在实验中我们发现NaN3处理对烟草细胞的抗氰呼吸途径有一定诱导作用,可提高AOX蛋白的表达水平,这可能是烟草细胞自我保护以对抗NaN3的一种机制。 2、我们从一种寄生于长春花上的疫霉属真菌的培养液中初步纯化了耐高温的激发子组分,其主要成分为37kD和40kD的两种蛋白。用初步纯化的激发子接种烟草叶片可诱导过敏性枯斑产生,在9.6μg Pro/ml的浓度下则可明显诱导烟草悬浮细胞死亡。我们对其诱导烟草细胞死亡的机理进行了研究,发现该激发子对呼吸链活性没有直接的抑制作用,但激发子处理1hr后烟草细胞的细胞色素途径受到一定的抑制,其胞内的ATP水平也显著降低,因此激发子诱导细胞死亡可能与其降低细胞内的ATP水平有关。经激发子处理12hr后烟草细胞的细胞质中细胞色素c含量明显升高,说明细胞色素c跨线粒体膜迁移到细胞质中诱导细胞死亡这一机制也可能参与了激发子对烟草细胞死亡的诱导。 3、一些文献提出细胞色素c跨线粒体膜迁移到细胞质中可诱导植物细胞死亡。为了研究细胞色素c在植物细胞死亡过程中的动态变化,我们运用免疫胶体金标记技术观察了用NaN3和激发子诱发的烟草细胞死亡过程中细胞色素c的亚细胞分布情况。电镜观察结果发现在烟草叶片以及对照和经NaN3或激发子处理的烟草悬浮细胞中,只有细胞壁上没有胶体金颗粒分布,其它部位如线粒体、叶绿体、细胞质和细胞核上都有胶体金颗粒分布,表明细胞色素c存在于除细胞壁以外的任何部位。我们用外源细胞色素c处理烟草悬浮细胞,发现细胞色素c对细胞死亡有一定诱导作用。对于在处理与非处理细胞的细胞质中都