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目的：构建葡萄球菌肠毒素A（staphylococcalenterotoxinA，SEA）与锚定蛋白GPI的真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI，转染喉癌Hep-2细胞，制备exosomes，检测SEA在exosomes中的表达。 方法：利用NOTI双酶切法切断原核生物质粒pGSI-SEA-GPI粘性末端（NOTI酶切位点），琼脂糖电泳法分离目的基因-SEA-GPI-，普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂提取-SEA-GPI-，利用T4连接酶连接真核表达质粒pmiR-RB-REPORT与-SEA-GPI-，构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI。脂质体法将pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI转染喉癌Hep-2细胞，提取喉癌细胞中的RNA，荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测目的基因-SEA-GPI-在喉癌细胞的转录情况。采用exosomes提取试剂盒提取喉癌细胞分泌的exosomes，透射电镜对exosomes做形态等鉴定，Westernblot测定SEA在exosomes中的表达。 结果：通过琼脂糖凝胶电泳法鉴定pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI基因碱基序列，表明构建成功。真核表达质粒转染喉癌细胞，qRT-PCR测出其在喉癌细胞中有效转录，透射电镜成功观测到转染后喉癌细胞分泌的exosomes，Westernblot测出exosomes中有SEA表达，表明喉癌细胞分泌的exosomes含有SEA，SEA通过GPI结构锚定于exosomes膜上。 结论：成功构建了真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI，将其转染喉癌Hep-2细胞后，制备exosomes，SEA通过GPI结构锚定在exosomes上，为增强肿瘤局部免疫效应，制备SEA-GPI锚定蛋白的SEA-eoxsomes抗喉癌瘤苗，作出了探索。