头孢克肟纳米乳的研制及药效学研究

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目的:本研究通过制备头孢克肟纳米乳(CFM-NE),并对其质量、稳定性、安全性、体外抑菌效果和临床药效进行评价,为头孢克肟纳米乳在兽医临床上的应用提供实验依据。方法:(1)测定头孢克肟在不同油相中的溶解度,利用伪三元相图法筛选并优化处方,确定最佳配方,制备头孢克肟纳米乳,用染色法鉴别其结构类型,用透射电镜和激光粒度分析仪考察CFM-NE的形态和粒径分布,并测定Zeta电位和多分散系数(PDI),通过高速离心试验、温度试验、光稳定性试验和加速试验对其进行稳定性研究;(2)建立了CFM-NE中CFM含量测定的紫外分光光度法;(3)通过小鼠急性毒性试验,对CFM-NE的安全性进行评估,并根据公式计算其LD50及95%可信限;(4)采用美国国家临床实验标准委员会(NCCLs)制定的微量肉汤稀释法,检测CFM-NE对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、无乳链球菌、不动杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC),研究CFM-NE的体外抑菌效果;(5)对10日龄雏鸡进行人工感染大肠埃希菌,将雏鸡分为CFM-NE高、中、低剂量组、CFM预混剂对照组、感染对照组和健康对照组,考察各给药组对感染鸡的治疗有效率和治愈率,从而对CFM-NE防治雏鸡大肠埃希菌感染的临床疗效进行初步研究。结果:(1)CFM-NE各组分的质量分数为:EL-4027.1%、肉桂醛6.8%、头孢克肟2.0%、蒸馏水64.1%;其类型为O/W型;乳滴呈圆形,分散均匀,平均粒径为12.1nm,多分散系数是0.141,Zeta电位是-10.6mV;经高速离心试验、温度及光稳定性试验和加速试验表明CFM-NE稳定性良好。(2)CFM在10~100μg/mL浓度范围内线性关系良好;所测得的平均回收率为(99.49±0.481)%,RSD为0.483%,表面该方法的准确度高;6次重复测量的吸收度值为0.1587,RSD为0.325%,表明该方法的重复性良好;日内精密度的RSD为0.345%,日间精密度的RSD为0.435%,均小于1%。(3)CFM-NE口服LD50为4116mg/kg,LD50的95%可信限为:3641~4653mg/kg,属于低毒级药物,安全性好。(4)头孢克肟纳米乳对致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、无乳链球菌和不动杆菌的MIC分别为:1,4,4,2,8μg/mL,MBC分别为2,8,8,4,16μg/mL,均小于CFM原料药、阿莫西林分散片和头孢氨苄胶囊,杀菌效果显著。(5)CFM-NE高、中、低剂量组的治愈率分别为:90%、80%、66.7%,有效率分别为93.3%、86.7%、73.3%,头孢克肟预混剂组的治愈率为53.3%,有效率为63.3%,感染对照组的治愈率为26.7%,有效率为26.7%。由统计结果知,CFM-NE高、中剂量组的平均增重差异不显著,与感染对照组相比,差异极显著(P<0.01),与头孢克肟预混剂组相比,差异极显著(P<0.01),与CFM-NE低剂量组相比,差异极显著(P<0.01)。结论:本研究制备出的头孢克肟纳米乳澄清透明,稳定性良好,质量体系符合要求,口服安全性好,属低毒药物,抑菌效果显著,对临床雏鸡感染大肠埃希菌病的治疗效果明显优于头孢克肟预混剂组。
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