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研究目的:脑胶质瘤为目前最多见的原发颅内恶性肿瘤,近年来发病率逐年递增,每年的增长率达到了1.2%。脑胶质瘤最主要的特性之一是呈浸润性生长,这就使目前的主流治疗方法,最大限度的通过手术完全切除肿瘤组织变得无比艰难。随着生命科学领域高通量测序技术和基因微阵列技术的不断发展和大规模应用,以及肿瘤领域分子靶向药物治疗的深入研究和应用,越来越多的证据表明Lnc RNA在脑胶质瘤等恶性肿瘤中异常表达,通过其恶性生物学行为调控肿瘤的发生发展。Lnc RNA是非编码RNA家族中数量最多nc RNA,长度大于200个核苷酸,缺乏完整的开放阅读框,没有蛋白质编码功能,最初被认为是基因组转录的副产物。多个Lnc RNA被发现在神经胶质瘤中发挥癌基因(和)或抑癌基因作用,并且与临床表现、诊断、分子靶向治疗、患者转归和预后等密切相关。目前,关于长非编码RNA LINC01116在人脑胶质瘤中的表达水平及可能的生物学研究鲜少报道。因此,我们利用脑胶质瘤相关公共数据库联合生物信息学分析,筛选出在脑胶质瘤中差异表达的长非编码RNA LINC01116;探讨LINC01116在脑胶质瘤临床样本和脑胶质瘤细胞水平的表达水平和相关的临床意义;下调LINC01116的表达研究其在U251、Ln229和U87脑胶质瘤细胞系中调控瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移能力、细胞周期的能力以及对体内胶质瘤生长的影响;上调LINC01116的表达研究其在U251脑胶质瘤细胞系中调控瘤细胞的增殖和侵袭迁移能力的影响。研究方法:(1)利用生物信息分析公共数据平台大样本脑胶质瘤芯片数据(GEO)及测序数据(TCGA)差异表达基因,筛选出脑胶质瘤中的差异表达基因长非编码RNA LINC01116,并利用TCGA临床数据分析LINC01116表达水平与脑胶质瘤患者的预后关系。(2)收集临床手术切除的脑胶质瘤组织样本27例及非瘤脑组织10例,通过q RT-PCR检测比较LINC01116在脑胶质瘤组织和非瘤脑组织中的表达,并与收集的临床病理资料进行相关性分析。(3)通过q RT-PCR检测比较LINC01116在脑胶质瘤细胞系U251、Ln229、U87和正常人脑星形胶质细胞系SVG中的表达,进行功能缺失实验和功能获得实验。(4)构建LINC01116两条干扰序列,体外实验,在胶质瘤细胞系U251、Ln229和U87细胞中下调LINC01116表达水平;进行CCK8、克隆形成、EDU实验检测LINC01116对瘤细胞增殖能力的影响;进行流式细胞分析检测LINC01116对瘤细胞周期、凋亡的影响;进行transwell实验检测LINC01116对瘤细胞侵袭迁移的影响;体内实验,通过给免疫缺陷裸鼠皮下注射U87细胞,观察下调LINC01116表达水平后对体内胶质瘤生长的影响。(5)构建真核pc DNA3.1(-)为载体的过表达质粒,在胶质瘤细胞系U251细胞中上调LINC01116的表达水平;进行CCK8、克隆形成、EDU实验检测LINC01116对瘤细胞增殖能力的影响;进行transwell实验检测LINC01116对瘤细胞侵袭迁移的影响。研究结果:第一部分:(1)利用生物信息学分析脑胶质瘤组织芯片数据(GEO)及测序数据(TCGA)结果提示:LINC01116在脑胶质瘤中显著高表达(P<0.01)。生存分析提示LINC01116表达越高越不利于患者的生存。(2)q RT-PCR结果显示:LINC01116在人脑胶质瘤组织中的表达显著高于非瘤脑组织,其结果具有统计学意义(P<0.01);脑胶质瘤组织临床病理级别越高,组织类型越恶,LINC01116表达越高,结果具有统计学意义(P<0.01)。第二部分:(1)q RT-PCR结果显示:LINC01116在U251、Ln229、U87细胞的表达显著高于SVG细胞,其结果具有统计学意义(P<0.01);(2)在U251、Ln229和U87细胞系中干扰LINC01116的表达后进行CCK8、克隆形成、EDU实验,结果提示:敲低LINC01116的表达后胶质瘤细胞的增殖能力下降,结果具有统计学意义(P<0.05);(3)在U251、Ln229和U87细胞系中干扰LINC01116的表达后通过流式细胞分析进行细胞周期实验和细胞凋亡实验,结果提示:敲低LINC01116表达后能显著阻滞细胞周期的进程,细胞生长阻滞在G1-G0期,而进入DNA合成期S期的细胞减少,结果具有统计学意义(P<0.05);敲低LINC01116表达后瘤细胞的凋亡百分比均明显增加,凋亡瘤细胞增加,存活瘤细胞减少,结果具有统计学意义(P<0.05);(4)在U251、Ln229和U87细胞系中干扰LINC01116的表达后通过transwell进行侵袭和迁移实验,结果提示:敲低LINC01116表达后,U251、Ln229和U87细胞穿过小室基底膜的细胞数较对照组明显减少;结果具有统计学意义(P<0.05);(5)体内实验中,裸鼠成瘤结果提示:敲低LINC01116表达后裸鼠皮下瘤体生长减缓,重量及体积均较对照组下降,结果具有统计学意义(P<0.01);q RT-PCR检测瘤体LINC01116的表达提示:敲低组LINC01116的表达明显下降,与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。第三部分:(1)在U251细胞系中转染真核过表达质粒pc DNA-LINC01116后进行CCK8、克隆形成、EDU实验,结果提示:上调LINC01116的表达促进胶质瘤细胞的增殖能力,结果具有统计学意义(P<0.01);(2)在U251细胞系中转染真核过表达质粒pc DNA-LINC01116后通过transwell进行侵袭和迁移实验,结果提示:上调LINC01116表达后,U251细胞穿过小室基底膜的细胞数较对照组明显增多,结果具有统计学意义(P<0.01)。研究结论:LINC01116在人脑胶质瘤样本中的表达较非瘤脑组织明显升高,LINC01116的表达量与患者预后相关;体外实验中,在脑胶质瘤细胞系U251、Ln229和U87中,高表达的LINC01116可以促进脑胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移、抑制瘤细胞凋亡,促进细胞周期进程;体内实验中,LINC01116同样可以调控胶质瘤在活体内的发生发展。LINC01116在脑胶质瘤中发挥类似癌基因的作用。