LINC01116在脑胶质瘤中的表达及调控瘤细胞增殖、侵袭的实验研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong577
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究目的:脑胶质瘤为目前最多见的原发颅内恶性肿瘤,近年来发病率逐年递增,每年的增长率达到了1.2%。脑胶质瘤最主要的特性之一是呈浸润性生长,这就使目前的主流治疗方法,最大限度的通过手术完全切除肿瘤组织变得无比艰难。随着生命科学领域高通量测序技术和基因微阵列技术的不断发展和大规模应用,以及肿瘤领域分子靶向药物治疗的深入研究和应用,越来越多的证据表明Lnc RNA在脑胶质瘤等恶性肿瘤中异常表达,通过其恶性生物学行为调控肿瘤的发生发展。Lnc RNA是非编码RNA家族中数量最多nc RNA,长度大于200个核苷酸,缺乏完整的开放阅读框,没有蛋白质编码功能,最初被认为是基因组转录的副产物。多个Lnc RNA被发现在神经胶质瘤中发挥癌基因(和)或抑癌基因作用,并且与临床表现、诊断、分子靶向治疗、患者转归和预后等密切相关。目前,关于长非编码RNA LINC01116在人脑胶质瘤中的表达水平及可能的生物学研究鲜少报道。因此,我们利用脑胶质瘤相关公共数据库联合生物信息学分析,筛选出在脑胶质瘤中差异表达的长非编码RNA LINC01116;探讨LINC01116在脑胶质瘤临床样本和脑胶质瘤细胞水平的表达水平和相关的临床意义;下调LINC01116的表达研究其在U251、Ln229和U87脑胶质瘤细胞系中调控瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移能力、细胞周期的能力以及对体内胶质瘤生长的影响;上调LINC01116的表达研究其在U251脑胶质瘤细胞系中调控瘤细胞的增殖和侵袭迁移能力的影响。研究方法:(1)利用生物信息分析公共数据平台大样本脑胶质瘤芯片数据(GEO)及测序数据(TCGA)差异表达基因,筛选出脑胶质瘤中的差异表达基因长非编码RNA LINC01116,并利用TCGA临床数据分析LINC01116表达水平与脑胶质瘤患者的预后关系。(2)收集临床手术切除的脑胶质瘤组织样本27例及非瘤脑组织10例,通过q RT-PCR检测比较LINC01116在脑胶质瘤组织和非瘤脑组织中的表达,并与收集的临床病理资料进行相关性分析。(3)通过q RT-PCR检测比较LINC01116在脑胶质瘤细胞系U251、Ln229、U87和正常人脑星形胶质细胞系SVG中的表达,进行功能缺失实验和功能获得实验。(4)构建LINC01116两条干扰序列,体外实验,在胶质瘤细胞系U251、Ln229和U87细胞中下调LINC01116表达水平;进行CCK8、克隆形成、EDU实验检测LINC01116对瘤细胞增殖能力的影响;进行流式细胞分析检测LINC01116对瘤细胞周期、凋亡的影响;进行transwell实验检测LINC01116对瘤细胞侵袭迁移的影响;体内实验,通过给免疫缺陷裸鼠皮下注射U87细胞,观察下调LINC01116表达水平后对体内胶质瘤生长的影响。(5)构建真核pc DNA3.1(-)为载体的过表达质粒,在胶质瘤细胞系U251细胞中上调LINC01116的表达水平;进行CCK8、克隆形成、EDU实验检测LINC01116对瘤细胞增殖能力的影响;进行transwell实验检测LINC01116对瘤细胞侵袭迁移的影响。研究结果:第一部分:(1)利用生物信息学分析脑胶质瘤组织芯片数据(GEO)及测序数据(TCGA)结果提示:LINC01116在脑胶质瘤中显著高表达(P<0.01)。生存分析提示LINC01116表达越高越不利于患者的生存。(2)q RT-PCR结果显示:LINC01116在人脑胶质瘤组织中的表达显著高于非瘤脑组织,其结果具有统计学意义(P<0.01);脑胶质瘤组织临床病理级别越高,组织类型越恶,LINC01116表达越高,结果具有统计学意义(P<0.01)。第二部分:(1)q RT-PCR结果显示:LINC01116在U251、Ln229、U87细胞的表达显著高于SVG细胞,其结果具有统计学意义(P<0.01);(2)在U251、Ln229和U87细胞系中干扰LINC01116的表达后进行CCK8、克隆形成、EDU实验,结果提示:敲低LINC01116的表达后胶质瘤细胞的增殖能力下降,结果具有统计学意义(P<0.05);(3)在U251、Ln229和U87细胞系中干扰LINC01116的表达后通过流式细胞分析进行细胞周期实验和细胞凋亡实验,结果提示:敲低LINC01116表达后能显著阻滞细胞周期的进程,细胞生长阻滞在G1-G0期,而进入DNA合成期S期的细胞减少,结果具有统计学意义(P<0.05);敲低LINC01116表达后瘤细胞的凋亡百分比均明显增加,凋亡瘤细胞增加,存活瘤细胞减少,结果具有统计学意义(P<0.05);(4)在U251、Ln229和U87细胞系中干扰LINC01116的表达后通过transwell进行侵袭和迁移实验,结果提示:敲低LINC01116表达后,U251、Ln229和U87细胞穿过小室基底膜的细胞数较对照组明显减少;结果具有统计学意义(P<0.05);(5)体内实验中,裸鼠成瘤结果提示:敲低LINC01116表达后裸鼠皮下瘤体生长减缓,重量及体积均较对照组下降,结果具有统计学意义(P<0.01);q RT-PCR检测瘤体LINC01116的表达提示:敲低组LINC01116的表达明显下降,与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。第三部分:(1)在U251细胞系中转染真核过表达质粒pc DNA-LINC01116后进行CCK8、克隆形成、EDU实验,结果提示:上调LINC01116的表达促进胶质瘤细胞的增殖能力,结果具有统计学意义(P<0.01);(2)在U251细胞系中转染真核过表达质粒pc DNA-LINC01116后通过transwell进行侵袭和迁移实验,结果提示:上调LINC01116表达后,U251细胞穿过小室基底膜的细胞数较对照组明显增多,结果具有统计学意义(P<0.01)。研究结论:LINC01116在人脑胶质瘤样本中的表达较非瘤脑组织明显升高,LINC01116的表达量与患者预后相关;体外实验中,在脑胶质瘤细胞系U251、Ln229和U87中,高表达的LINC01116可以促进脑胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移、抑制瘤细胞凋亡,促进细胞周期进程;体内实验中,LINC01116同样可以调控胶质瘤在活体内的发生发展。LINC01116在脑胶质瘤中发挥类似癌基因的作用。
其他文献
处于胴体与环境界面位置和具有复杂粗糙表面结构的鸡皮是屠宰加工过程中限制降低肉品初始细菌总数的关键污染部位,鸡皮的细菌污染在屠宰加工中容易导致胴体和分割品的细菌交叉污染,引发肉的变质和货架期缩短问题。诸多屠宰细菌污染研究报道认为羽毛毛囊在鸡皮细菌污染中起到重要作用,增加了鸡皮减菌处理的难度。然而,毛囊在鸡皮减菌处理中的作用机理尚不清楚,研究毛囊在鸡皮减菌处理中的作用机理有利于发展新型鸡胴体细菌污染控
业财融合在现代企业管理中深入发展,本文以业财融合背景下的烟草企业预算定额管理为研究对象,深入分析预算定额管理对于烟草企业管理的重要意义,对预算定额管理实施中存在的问题进行总结,并有针对性地提出优化策略,以期对烟草企业实现降本增效、提升管理质效提供一定的参考意义。
“会计基础工作规范”作为会计改革与发展“十四五”规划的基础性文件,对会计事业高质量发展具有重要作用。本文通过问卷调研,分析了国企、民企、行政事业单位、社会团体等多个市场主体的会计基础工作规范实施路径,揭示了“会计基础工作规范”实施过程出现的问题,涉及会计机构和会计人员、会计核算、内部会计管理制度、会计核算监督4个方面及会计机构设置和会计人员配备不规范、会计档案管理不规范、未建立健全内部会计管理制度
明确葱轮作后对三七连作土壤微生物的影响,为利用葱与三七轮作缓解三七连作障碍提供依据。本研究在三七连作土上连续种植两茬小葱,以休耕连作土壤为对照,采用细菌16S rRNA和真菌ITS区测序,研究葱轮作后对土壤微生物多样性、物种组成及关键微生物的影响;然后分离可培养的关键细菌假单胞菌属,验证其对三七根腐病菌的拮抗功能。结果表明,葱轮作后显著提高了三七连作土壤细菌和真菌的丰富度,两种处理后的细菌和真菌在
目的 基于中医传承辅助平台V2.5软件归纳并探析《中医方剂大辞典》中所载的具有治疗喘证有关方剂的组方用药规律。方法 筛取《中医方剂大辞典》中记载能够治疗喘证的方剂,通过中医传承辅助平台V2.5,录入喘证有关方剂信息,组建《中医方剂大辞典》喘证数据库,利用中医传承辅助平台所包含的关联规则、复杂系统熵聚类数据挖掘功能,归纳出治疗喘证方剂的常用中药、组合规则、显性与隐性药对并发现新方。结果 共筛选出43
现阶段,工程施工优化在大型建筑项目中的作用日益凸显,建筑工程施工过程中存在的问题和缺陷已越发突出。建筑工程施工质量带来的直接影响,是业主与施工单位共同关注的重点问题,如何更好地严格控制工程施工尤为重要,这对于促进我国建筑工程项目经济和社会效益的提高具有十分重要的作用。对此,建筑行业有必要做好各项工程施工管理工作,通过开展施工优化,有助于提高建设质量。本文将结合大型建筑项目工程施工过程中存在的问题,
研究采用水蒸气蒸馏法对澳洲坚果叶精油进行提取,以精油提取率为指标,通过单因素试验和正交试验,最终得出水蒸气蒸馏法提取澳洲坚果叶精油的最佳工艺条件为:料液比1︰5 (g/mL)、NaCl质量浓度2.5 g/100 mL、蒸馏时间3 h。且各因素对精油提取率的影响程度大小排序为:料液比>蒸馏时间>NaCl质量浓度。
通过自建成膜基料评价体系,甄选出环氧树脂为基料。采用开发的室内热反射涂层降温测试设备和测试方法,以钛白粉、中空微珠、消光粉为颜填料,通过正交试验确定了颜填料最佳配比。路用热反射涂层实际降温测试表明:与未铺装热反射涂层的路面相比,铺装热反射涂层的路面表面降温约5. 9℃,路面内部2cm处降温约7℃,降温效果明显。
泡桐丛枝病是由植原体引起的一种传染性病害,是影响泡桐产业化发展的重要问题之一。在过去的40多年中,科研工作者对泡桐丛枝病的发病植株进行了形态、生理生化等方面研究,但限于植原体很难体外培养且泡桐和植原体基因组未公布,致使植原体的致病机理和丛枝病的发病机理研究仍未阐述清楚。本实验室前期研究表明,适宜浓度的甲基磺酸甲酯(MMS)和利福平处理能使丛枝病幼苗的形态转变为健康苗,且体内检测不到植原体的存在。为
本文以大樱桃为供试材料,研究复合微生物菌剂在治理大樱桃连作障碍的应用效果。结果表明,复合微生物菌剂可提高大樱桃土壤中溶磷固氮功能有关的细菌丰度,减少病原菌及寄生线虫数量,对大樱桃土壤连作障碍治理有一定效果;施用复合微生物菌剂的大樱桃植株长势旺盛,坐果率高,果实着色均匀,果形端正,口味醇正,商品性好,大樱桃增产提质效果显著,单果重提高0.60g,着色率提高4.22%,可溶性固形物含量提高2.04%,