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研究目的:利用化学合成的方法获得C末端突变成半胱氨酸的Byetta类似物(Ex4C),再用不同分子量大小的马来酰亚胺活化的mPEG(MAL-mPEG)对其半胱氨酸的游离巯基进行定点修饰,修饰后产物用阴离子交换色谱和反相色谱进行纯化。通过测定其体外刺激RINm5F细胞释放cAMP的水平,以及体内对db/db模型小鼠的降血糖作用来评价其生物活性。以期获得一种长效促胰岛素分泌肽修饰物。研究方法:(1)利用化学合成的方法获得C末端突变成半胱氨酸的Byetta类似物(Ex4C)。①Ex4C纯度检测,包括RP-HPLC,SEC-HPLC方法的建立.②Ex4C质量研究,包括质谱分子量,游离半胱氨酸的脱巯基验证。③马来酰亚胺活化的mPEG(MAL-mPEG)质量研究,包括RP-HPLC-ELSD,SDS-PAGE碘染方法的建立(2) Ex4C的MAL-mPEG修饰研究。包括修饰比例,修饰方法,游离PEG检测。(3) MAL-mPEG-Ex4C分离纯化研究。包括疏水层析、凝胶过滤层析、反相层析,阳离子交换层析。(4) MAL-mPEG-Ex4C药理学研究。包括MAL-mPEG-Ex4C在猕猴体内的初步药代学研究,体外刺激RINm5F细胞释放cAMP水平,体内对db/db模型小鼠的降血糖作用研究。研究结果:(1)Ex4C分子量和理论值完全一致,纯度达98%以上,半胱氨酸游离巯基完全暴露;mPEG(MAL-mPEG)纯度达92%以上,分子量和理论值完全一致(2)MAL-mPEG-Ex4C经修饰条件研究,修饰率达80%以上。且建立了游离PEG检测方法。(3)MAL-mPEG-Ex4C经纯化条件研究,完全除去修饰的Ex4C单体,二聚体,游离的PEG,以及高分子PEG,纯化后纯度达98%以上(4)MAL-mPEG-Ex4C药理学研究结果显示,促胰岛素分泌肽经5k、20k、35k分子量大小的mPEG修饰后体外刺激RINm5F细胞释放cAMP的ED50分别为1.61ng/ml、15.68ng/ml、32.95ng/ml。20k-MAL-mPEG-Ex4C在猕猴体内半衰期为2.63天,且对db/db模型小鼠具有明显的降血糖作用。