松花粉指纹图谱数据信息库研究与建立初探

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松花粉含有丰富的营养成分,其特点是多成分、多靶点、多途径调节人体机能,许多专家和机构对其进行过大量的研究。目前保健食品发展方向是向功能因子明确的第三代产品转移,保健功能因子的研究已引起国内外高度重视。多不饱和脂肪酸、总皂甙和微量元素均是重要的功能因子,本研究在单品种松花粉和方法学研究的基础上,采用分光光度法、GC-MS和TXRF检测、中药指纹图谱相似度软件对检测结果进行分析,以期得到不同品种松花粉在各功效因子之间的异同,同时也从中药四性、药效和物质基础的角度对松花粉进行了初探。本论文主要分四部分:第一部分:简单介绍了松花粉的功效成分、药理、功效等研究现状;综述了松花粉中脂肪酸和总皂甙的检测手段及研究意义;概述了TXRF同时检测多元素的优势。第二部分:利用索氏提取-甲酯化-气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分离测定了不同树种松花粉中12种主要脂肪酸相对含量并进行了比较。结果表明除棕榈酸和珠光脂酸外,其他10种脂肪酸平均相对含量不同树种松花粉间均存在显著性差异(P≤0.05)。饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸平均相对含量不同树种松花粉间均存在极显著性差异(P≤0.01)。第三部分:利用分光光度法测定了不同树种、不同产地松花粉中总皂甙含量。由正交试验结果和验证试验,得出此方法提取测定松花粉中总皂甙的最佳条件组合为:A2B3C2D3E3,即固液比(1:20),超声时间(60min),超声次数(2次),显色温度(60℃),显色时间(15min)。由极差R得出影响总皂甙提取测定的因素依次是:超声次数,超声时间,固液比,显色温度,显色时间。研究结果表明:破壁前后马尾松松花粉中总皂甙测定结果相差非常大,破壁后的松花粉的总皂甙含量高于未破壁的松花粉总皂甙含量两倍以上。不同产地马尾松松花粉中总皂甙含量差异较大。其中,山东>江西>安徽>重庆>山西,山东马尾松松花粉中总皂甙含量最高,山西,重庆和安徽较低。山东地区不同树种的松花粉中总皂甙含量差异很大。其中,马尾松>赤松>油松>黑松。马尾松花粉总皂甙含量最高,黑松含量偏低。第四部分:松花粉原料经过微波消解进行样品前处理,采用全反射X射线荧光光谱净计数、QXAS分析软件解谱和单一内标法对样品中K、Ca、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Rb、Sr、Sn、Ti、Cd和Pb等15种元素进行定量分析(由于TXRF钼靶条件限制,文中Cd数据均来自ICP-MS)。在最佳条件下,方法的相对标准偏差(RSDs)在1.6%(K)~6.1%(Pb)之间(试剂空白,n=5),标准加入回收率为94.3%(Ti)~102.4%(Ca),定量下限(QL,10σ)为0.002mg/kg(Ni、Cu、Zn、Rb)~0.120mg/kg(K)。比较了马尾松、云南松、油松、黑松、赤松等5种松花粉中15种元素含量,5种松花粉中都含有这15种元素;Ca、Mn、Zn、 Rb和Ti等5种元素平均含量在不同树种间均存在极显著性差异(P≤0.01),K、Co、Fe、Cu、Sr、Sn和Cd等7种元素平均含量在不同树种间均存在显著性差异(P≤0.05)Cr、Ni和Pb等3种元素平均含量在不同树种间未发现显著差异;研究还表明松花粉具有温性或温性偏凉性药的元素谱征。从本次研究结果可以初步断定,松花粉中这15种元素的含量和树种有关,和生长环境、地域等密切相关。
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