目的:近年来发现PAMl4蛋白可与Rb等介导转录蛋白结合，因而该蛋白很可能在转录调控中发挥重要作用。为此，我们构建了带GFP标签的PAMl4(protein associated withMRG, 14kd)表达载体，将其转染至HEK 293T细胞检测其表达，转染至COS7细胞观察PAMl4蛋白在细胞内的定位。 方法:以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板，用PCR方法扩增PAMl4编码序列，用限制性内切酶酶切PCR产物，回收的目的片段，然后插入带GFP标签的载体pCDGFP中构建表达载体pCDGFP-PAM14。经酶切和测序鉴定正确后，将构建正确的质粒转染至HEK 293T细胞，提取蛋白质，用western印迹法检测其表达；转染至COS7细胞，在荧光显微镜下观察其在细胞内的定位。 结果:经限制性内切酶酶切图谱分析及DNA序列测定证实pCDGFP-PAM14的构建是正确的，western印迹法检测此表达载体在HEK 293T细胞中能够有效表达，荧光显微镜下观察表明PAM14主要在COS7细胞的细胞核内定位，胞质内也有少量表达。 结论:成功构建表达载体pCDGFP-PAM14，通过细胞转染明确此表达载体在HEK293T细胞中能够有效表达，且PAM14主要在COS7细胞的胞核内定位。实验结果为进一步了解PAM14的功能提供了一定的基础。