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目的化疗是许多恶性肿瘤的主要治疗方法之一。化疗药物虽然通过各种不同的机制作用发挥抗肿瘤作用,但它们长期以来被认为是抑制机体的免疫应答。近年来的研究表明许多抗肿瘤药物具有调节免疫应答的作用,这为化疗和免疫治疗联合应用提供了理论支持。目前肿瘤的免疫治疗已成为继外科手术、放疗、化疗之后第四类已被证明具有显著临床治疗效果及优势的抗肿瘤疗法。CTX与过继细胞治疗(ACT)联合治疗时能显著增强CD4+T细胞的抗肿瘤免疫应答作用并能引起小鼠已建立的肿瘤消退。本研究拟通过对一些常用化疗药物的筛查来开发更多的具有类似CTX作用的化疗药物,并探讨其作用机理,从而为临床上设计和完成更有效的化疗联合免疫治疗提供新的思路和理论依据。方法我们用动物模型试验,将苯丁酸氮芥、替莫唑胺、卡莫司汀、紫杉醇、吉西他滨、阿霉素和马法兰等化疗药物分别与能特异性识别肿瘤的CD4+T细胞过继治疗联合应用,通过流式细胞术来筛选出能增强肿瘤特异性的CD4+T细胞抗肿瘤免疫应答的化疗药物。然后通过动物实验分析筛选出的药物对肿瘤微环境中各种不同的免疫细胞和细胞因子的影响；分析其对内源性T淋巴细胞的效应；通过体外培养肿瘤细胞分析该筛选出的药物是否能引起CRT的膜转位和释放HMGB1至胞外;观察在不同的动物模型中筛选出的药物联合CD4+T细胞过继治疗的疗效。结果通过对几种常用化疗药物苯丁酸氮芥、替莫唑胺、卡莫司汀、紫杉醇、吉西他滨、阿霉素和马法兰等的筛查,发现仅Melphalan和CTX一样能有效逆转这种变异的CD4+T细胞应答,促进肿瘤特异性的CD4+T细胞大量扩增和向有利的效应细胞分化。Melphalan能引起肿瘤微环境中免疫细胞的动态变化,可引起一过性的淋巴细胞缺乏。通过对细胞因子的分析,发现Melphalan可诱导产生炎性细胞因子的微环境。此外,Melphalan还能促进肿瘤细胞发生CRT的膜转位和释放HMGB1,即能使肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡。Melphalan还能激活宿主内源性CD8+T细胞。在A20HA和CT26HA两种皮下种植瘤小鼠模型中,melphalan与肿瘤特异性CD4+T细胞过继治疗连用可获得协同增强的抗肿瘤效应。结论Melphalan能增强肿瘤特异性的CD4+T细胞的抗肿瘤免疫,两者联合应用可明显延缓肿瘤生长,获得更强的抗肿瘤效应。可能与Melphalan调节肿瘤的免疫微环境、激活内源性CD8+T细胞、诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡等机制有关。这些发现对于临床设计和完成更有效的抗肿瘤化疗免疫联合治疗有重要的指导意义。