目的：骨、牙齿之外的非骨性组织发生钙化，伴或不伴组织坏死或损伤，均称为异位钙化。心血管系统的异位钙化常见于老年人及高血压、动脉粥样硬化、糖尿病和慢性肾病患者，包括动脉内膜（动脉粥样硬化相关钙化）、动脉中层（Mo"nckebergs sclerosis）和心脏瓣膜钙化，无论发生在哪个部位，都会引起血流动力学和机械力学的改变，使动脉管壁僵硬，收缩压升高、舒张压降低，脉压差增大，冠状动脉灌注降低，最终将导致左室肥大、心肌缺血和心律失常，并增加卒中和猝死的危险。血管钙化是动脉粥样硬化、糖尿病、肾病、衰老、高血压等多种疾病的病理生理基础，是心血管疾病的主要危险因子，出现在80％血管损伤和90％冠脉疾病中。较无钙化者，任何程度的冠状动脉钙化整体相对危险度为4.3，3～5年冠心病事件（心肌梗死或心源性死亡）增加4倍。深入研究血管钙化的发病机制，预防、延缓或逆转血管钙化的发生，具有重要的临床意义。　　 既往认为血管钙化是过饱和的钙、磷在血管壁的被动沉积，近年证实是由细胞和分子参与的、类似于骨形成的主动过程。钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶家族成员，分类上属于PP2B家族，是唯一受Ca2+/钙调素调节的磷蛋白磷酸酶。CaN主要表达于细胞浆中，组织分布广泛，通过使底物活化T细胞核因子（Nuclear factor of activated T cells，NFATs）去磷酸化和核内转位，激活下游基因转录，参与多种细胞功能调节。环鸟苷酸依赖的蛋白激酶（cGMP-dependent protein kinase，PKG）是广泛存在于真核细胞内的一种丝/苏氨酸蛋白激酶，存在于多种组织细胞，是重要的信号分子NO的下游底物，能够在多种水平调节Ca2+水平，从而参与多种细胞功能调节。近年研究已证实CaN能够抑制培养血管平滑肌细胞（VSMCs）胞浆内PKG I的表达，而CaN在钙化血管中与PKG的关系目前国内外尚未见有报道。　　 本试验采用华法令和维生素D3建立大鼠血管钙化模型，测定主动脉CaN mRNA、蛋白质的表达与活性及PKG mRNA、蛋白质的表达，并观察CaN对PKG表达的影响，初步探讨CaN及PKG对血管钙化的调节作用，为血管钙化的临床防治提供新的思路。　　 方法：4w SD雄性大鼠36只，体重80～90g，随机分为3组，每组12只。A组：对照组；B组：钙化组；C组：环孢霉素A组；实验第1－8天，各组均给予维生素K115mg·kg-1·d-1，皮下注射。同时，C组另给予环孢霉素A10mg·kg-1·d-1腹腔注射；A组和B组分别给予等量生理盐水腹腔注射。第3天开始，B、C组另给予维生素D33×105U·kg-1·d-1，皮下注射，持续至实验第5天，同时给予华法令15mg·100g-1，12h一次，皮下注射，持续至第8天；对照组在相同时间给予等量生理盐水皮下注射。实验第9天，所有动物麻醉后处死。开胸，暴露出心脏，分离胸主动脉，并向下剖开腹部，分离出腹主动脉，从主动脉根部至腹主动脉分叉处剪下主动脉。取材后每组各取6只以免疫组化法测定CaNB1蛋白及PKGⅠ。蛋白，原位杂交法测定CaNAα mRNA及PKGⅠ。mRNA；6只用于CaN和碱性磷酸酶（ALP）活性测定。将免疫组织化学和原位杂交结果应用Image-Pro Plus图象分析软件，分别计算各组主动脉组织相同面积内阳性细胞的累积光密度值（integrated optic density，IOD）。所有数据以均数±标准差（x±s）表示，运用SPSS13.0统计软件，首先对计量资料进行正态性检验及方差齐性检验，组间资料比较应用单因素方差分析，两两比较应用LSD-t检验，p<0.05即有统计学意义。　　 结果：（1）HE染色结果示对照组大鼠主动脉壁结构完整，中层血管平滑肌细胞（VSMCs）排列整齐；钙化组和环孢霉素A组大鼠主动脉中层VSMCs排列紊乱，弹力纤维迂曲断裂。VonKossa染色示钙化组大鼠主动脉中层弹性纤维间有大量黑色颗粒沉积；环孢霉素A组大鼠主动脉中层弹性纤维间亦可见黑色颗粒沉积；对照组未见明显黑色颗粒沉积。（2）免疫组织化学结果显示三组大鼠主动脉可见一定量CaNB1蛋白及PKGⅠ。蛋白表达，主要位于胞浆内。钙化组与对照组对比：钙化组大鼠主动脉CaNB1蛋白（8731.93±469.92）较对照组（5500.95±982.57）表达明显增加（p<0.01），PKGⅠα蛋白（2305.108±628.08001）较对照组（4960.409±911.34036）表达明显减少（p<0.01）；CsA组与对照组对比：CsA组大鼠主动脉CaNB1蛋白（7712.79±539.20）较对照组（5500.95±982.57）表达明显增加（p<0.01），PKGⅠα蛋白（7889.977±850.80532）较对照组（4960.409±911.34036）表达也明显增加（p<0.01）；CsA组与钙化组对比：CsA组大鼠主动脉CaNB1蛋白（7712.79±539.20）较钙化组（8731.93±469.92）表达减少（p<0.05），PKGⅠα蛋白（7889.977±850.80532）较钙化组（2305.108±628.08001）表达明显增加（p<0.01）。（3）原位杂交结果显示三组大鼠主动脉可见CaNAα mRNA及PKGⅠαmRNA表达，主要位于胞浆中。钙化组与对照组对比：钙化组大鼠主动脉CaNAαmRNA（26420.97±1697.97）较对照（10302.17±2636.06）表达明显增加（p<0.01），PKGⅠαmRNA（5773.905±642.80153）较对照组（8713.067±740.37046）表达明显减少（p<0.01）；CsA组与对照组对比：CsA组大鼠主动脉CaNAαmRNA（16775.25±4029.59）较对照组（10302.17±2636.06）表达明显增加（p<0.01），PKGⅠαmRNA（11043.72±971.89608）较对照组（8713.067±740.37046）表达也明显增加（p<0.01）；CsA组与钙化组对比：CsA组大鼠主动脉CaNAα mRNA（16775.25±4029.59）与钙化组（26420.97±1697.97）比较表达明显减少（p<0.01），PKGⅠαmRNA（11043.72±971.89608）较钙化组（5773.905±642.80153）表达明显增加（p<0.01）。（4）钙化组 CaN活性（1.53±0.29μmolPi·mgprot-1·h-1）较对照组（0.90±0.39μmolPi·mgprot-1·h-1明显增加（p<0.01）；CsA组CaN活性（1.54±0.40μmolPi·mgprot-1·h-1）较对照组（0.90±0.39μmolPi·mgprot-1·h-1）明显增加（p<0.01）；CsA组CaN活性（1.54±0.40μmolPi·mgprot-1·h-1）与钙化组（1.53±0.29μmolPi·mgprot-1·h-1）比较无显著性差异（p>0.05）。（5）钙化组ALP活性（463.38±65.09U·gprot-1）较对照组（360.04±49.01U·gprot-1）增加（p<0.05）； CsA组 ALP活性（479.78±74.67U-1gprot）较对照组（360.04±49.01 U·gprot-1）明显增加（p<0.01），与钙化组（463.38±65.09U·gprot-1）比较无显著性差异（p>0.05）。　　 结论：1.本实验采用华法令和维生素D3皮下注射成功地建立了大鼠主动脉钙化模型。2.本试验首次发现钙化大鼠主动脉中CaN mRNA和蛋白的表达和活性明显增加时，PKG mRNA和蛋白的表达明显减少，说明在钙化血管中CaN对PKG有抑制作用。3.免疫抑制剂CsA很可能促进血管钙化。