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背景肺癌是一个发病率、死亡率居肿瘤首位的疾病，且近年来我国肺恶性肿瘤的发生率明显升高。肺恶性肿瘤病人的病理分型中大部分是非小细胞肺癌（NSCLC），肺癌确诊时大部分已属晚期。虽然近年来手术、放疗、化疗、分子靶向药物等治疗手段有了长足的进步，但目前肺癌患者综合治疗效果及其预后等仍然难以令人满意。肺癌的发生发展是一个涉及多种癌基因变化的连续过程，探索肺癌相关基因的变化过程及相关机理，采取针对性的个体化靶向治疗措施，是肺癌诊断治疗研究的迫切需要。近年来，有关MicroRNA（miRNA）与肺癌特别是非小细胞肺癌（NSCLC）发生发展、诊断治疗的关系备受关注。miRNA是长约18-25个核苷酸的一类非编码小分子RNA。它们参与了众多的生物过程。在许多种人类的肿瘤中miRNA表达水平有着明显的变化，说明它在癌症产生、进展、转移等过程中发挥了重要的作用。其中，miRNA-145的肿瘤抑制作用近年来受到越来越多的关注，它可以调控多个与肿瘤有关的基因，进而调节肿瘤的产生、发展、侵袭、种植、转移等过程。Krüppel样因子4（Klf4）和Oct4(也称为Oct3/4)均为转录因子家族的成员。它们在不同肿瘤中表达水平不一。Klf4是一个双向调节基因，目前研究结果提示它在肺癌中发挥着肿瘤抑制基因的作用。Oct4在肺癌中高表达，通过抑制细胞凋亡而促进肿瘤的生长。既往的研究提示miRNA-145和与Klf4、Oct4关系非常密切，可能作为它的上游调控关键因子，通过调控Klf4、Oct4的表达，促进或者抑制细胞增殖、分化和凋亡。然而，我们对miR-145调控Klf4和Oct4的机制以及如何调控肺癌细胞的生物学行为的了解仍然很少，有待进一步研究明确。目的应用慢病毒载体、A549肺癌细胞株、裸鼠等，研究miRNA-145与Klf4、Oct4之间的相互关系以及可能的作用机制，并研究miRNA-145对肺癌细胞的周期、增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为的影响，以及miRNA-145对肺癌细胞在裸鼠体内成瘤情况的影响。方法1、构建miRNA-145的慢病毒过表达载体，用该载体侵染A549肺腺癌细胞株。Trizol法抽提细胞总RNA，并应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miRNA-145的表达水平来验证其侵染的有效性。2、侵染后应用Western-blots法检测预测靶基因（Klf4、Oct4）的表达情况。3、侵染后应用流式细胞仪分析A549肺腺癌细胞周期分布变化、凋亡情况。并通过CCK-8增殖实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、克隆平板实验等观察其对A549肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移等能力的影响。并应用裸鼠成瘤实验进一步验证miRNA-145对A549肺癌细胞株生物学行为的影响。[实验均分三组：实验组（MIR145）、空白组（BLANK、B）、阴性对照组（NC、N）]结果1、miRNA-145的慢病毒过表达载体构建成功， qRT-PCR的检测结果显示A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后hsa-miR-145-5p基因表达水平明显上调，说明慢病毒侵染有效。2、Western blot实验分析结果显示：与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后Oct4的表达水平明显下调（P<0.0001），且随着时间的延长表达下调的程度有所下降。与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后Klf4的表达水平明显下调（P<0.0001），且随着时间的延长表达下调的程度有所下降。3、流式细胞实验中周期实验结果显示：与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后出现S、G2期阻滞，增殖减缓（P<0.0001）。4、流式细胞实验中凋亡实验结果显示：与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后细胞凋亡特别是早期凋亡明显增加（P<0.0001）。5、CCK-8增殖实验结果显示：与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后细胞增殖能力明显降低。（P<0.0001）6、细胞迁移实验结果显示：与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后细胞迁移能力明显降低。（P<0.0001）7、细胞侵袭实验结果显示：与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后细胞侵袭能力明显降低。（P<0.0001）8、平板克隆形成实验结果显示：与空白组和阴性对照组相比，A549肺腺癌细胞被慢病毒过表达载体侵染后细胞平板克隆形成能力明显降低。9、裸鼠成瘤实验结果显示：细胞接种前BLANK、NC、 MIR145三组之间裸鼠体重无统计学意义（P>0.05）。随着时间的延长，各组裸鼠的体重均逐步增加，但最终MIR145组裸鼠的体重稍大于BLANK组以及NC组（P<0.05）。随着时间的延长，BLANK、NC、 MIR145三组裸鼠的瘤体的体积均逐步增加，但MIR145组瘤体体积始终小于BLANK组和NC组（P<0.0001）。而取瘤时瘤体重量MIR145组小于BLANK组和NC组（P<0.05）。结论本研究提示Klf4、Oct4是miRNA-145的靶基因。miRNA-145可以通过调控Klf4、Oct4来抑制A549肺腺癌细胞的增殖、侵袭、转移等能力，也可以抑制A549肺腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力。针对miRNA-145调节靶基因Klf4和Oct4的信号通路，设计阻断该通路信号传导的肺癌基因治疗或药物治疗策略，有可能为肺癌分子靶向治疗提供新靶点。