酶作为一种重要的生物催化剂，在生命、医药、食品等很多领域有重要应用。电泳媒介微分析（ElctrophoreticallyMediatedMicroAnalysis,EMMA）技术在酶分析研究中具有独特的优点而受到广泛关注。本论文旨在利用酶的手性特征，发展快速、简单、准确、在线甄别检测底物对映体。论文工作首次应用EMMA技术，利用酶的手性选择特性，发展了一种底物对映体的在线甄别和检测方法，并成功应用于食品中乳酸对映体的检测。论文工作中，通过改进EMMA进样模式，依次向毛细管中进样酶的手性对映体和样品，利用电泳迁移速度的不同和酶的高手性选择性，实现底物对映体的在线甄别和检测。我们优化了实验条件，包括EMMA进样条件、缓冲溶液的组成、辅酶NAD+及酶LDH的浓度等。在优化的实验条件下，手性底物对映体的检测仅需要2min，分离度达到11.0，产物NADH峰与底物浓度呈很好的线性关系（R2>0.99），手性检测的重现性达到RSD<1.5%（迁移时间）。该方法对乳酸对映体的检测限为49μM（L-乳酸）和26μM（D-乳酸）。利用该方法，我们测量了L-乳酸和D-乳酸酶反应的Km值，与经典酶法测定的结果吻合，证实了该方法的准确性。利用该方法对市售的三种酸奶和两种红酒中的乳酸含量进行测定，结果验证了该方法的实用性，表明该方法无需寻找合适的手性选择剂，利用酶的手性特征，在一次EMMA实验中便可实现手性对映体的快速在线准确检测，拓展了生物酶及EMMA技术的应用。