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可变剪接是真核生物mRNA前体一种重要的加工机制,有助于调控基因表达水平及组织特异性、丰富蛋白质种类等。互斥可变剪接是一种重要的可变剪接形式,在之前研究的互斥可变剪接事件中,两个或者多个选择性外显子的可变剪接不是单独发生的,而是相互协同,仅有一个选择性外显子被选择剪入成熟的mRNA中。然而,多个外显子串联成簇,作为一个整体参与互斥可变剪接的现象鲜有研究。 CG30427基因为蛋白编码基因,其编码的蛋白具有脂酰辅酶A还原酶活性,参与成体寿命确定、细胞吞噬等生化过程。黑腹果蝇CG30427基因共有2个组成型外显子和3个可变多外显子簇,分别含有4个、4个、5个外显子,这3个可变多外显子簇的剪接协同发生,最终只有一个可变多外显子簇剪入成熟的mRNA中。 在该研究中,运用生物信息学方法分析了21种果蝇的CG30427基因序列,发现可变多外显子簇内部内含子均偏小,并且剪接信号强度较大。我们设计了内含子延长实验和剪接信号强度减弱实验,试图破坏多个外显子成簇参与互斥可变剪接的局面。实验结果显示,当可变多外显子簇内部内含子发生序列延长或者剪接信号强度减弱后,原本多个外显子成簇参与互斥可变剪接的局面遭到破坏,表明内含子偏小和剪接信号强度较大是外显子发生成簇剪接的影响因素。此外,我们还通过实验证明了可变外显子簇内部内含子优先剪接以保证外显子成簇剪接的假想的正确性。 通过比较基因组学方法,在果蝇CG30427基因可变外显子簇1和2上游分别发现了38bp和40bp的两段保守序列。删除突变实验结果显示这两段保守序列影响黑腹果蝇CG30427基因的互斥可变剪接调控。 综上所述,该研究揭示了果蝇CG30427基因多个外显子串联成簇参与互斥可变剪接的原因和保障机制,丰富了互斥可变剪接的内涵;此外,发现了两段影响CG30427基因互斥可变剪接的保守序列,为后续研究奠定了基础。